【摘 要】
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加纳链霉菌(Streptomyces ghanaensis)是动物饲料添加剂黄霉素的主要生产菌。建立高效稳定的遗传操作系统是对该菌进行分子生物学研究和构建高产黄霉素基因工程菌的基础。以含
【基金项目】
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浙江省自然科学基金(Y19C010014)
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加纳链霉菌(Streptomyces ghanaensis)是动物饲料添加剂黄霉素的主要生产菌。建立高效稳定的遗传操作系统是对该菌进行分子生物学研究和构建高产黄霉素基因工程菌的基础。以含有基因整合型重组质粒pIJ8630-nsdA的Escherichia coli ET12567/pUZ8002为供体、加纳链霉菌ATCC 14672为受体进行接合转移,通过单因素试验与正交试验对接合转移过程中的关键影响因素进行优化。结果表明,WL50培养基为接合转移最适培养基,当受体加纳链霉菌ATCC 14672孢子在50℃条件下热激10 min、37℃预培养3 h后,与供体按细胞数比例1∶15混合后涂布于接合转移平板上,30℃培养14 h后覆盖50μg·mL-1安普霉素和500μg·mL-1萘啶酸时,接合频率最高,比优化前提高20. 3倍。
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