【摘 要】
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目的 建立CYP4A11 8590T＞C单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)的高分辨率熔解曲线(high resolution melting,HRM)检测方法.方法先采用温度梯度PCR,确定适宜
【机 构】
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南方医科大学药学院,广州军区广州总医院药学部
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目的 建立CYP4A11 8590T＞C单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)的高分辨率熔解曲线(high resolution melting,HRM)检测方法.方法先采用温度梯度PCR,确定适宜的退火温度;再利用正交试验,优化引物、DNA模板量和Mg2+量,最终确定PCR反应体系和反应条件.通过对607例无血缘关系的受试者基因组DNA进行HRM分析,并随机选择50例产物测序.结果 引物最适退火温度为57.8 ℃;PCR最佳反应体系为20 μl,包括2×conc dNTP mix 10 μl,上下游引物(10 μmol/L)各0.5 μl,DNA溶液(30 ng/μl)1.0 μl,Mg2+(2.5 mmol/L)1.5 μl和灭菌水6.5 μl.607例受试者中CYP4A11 8590TT、TC和CC基因型频率分别为54.7 %、37.6 %和7.7 %.结论该正交试验优化的HRM技术可用于检测CYP4A11 8590T＞C单核苷酸多态性,且其分析结果和测序结果一致.
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