【摘 要】
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目的:探讨鸢尾素对棕榈酸(palmitic acid,PA)诱导的胰岛β细胞功能和凋亡的影响.方法:培养INS-1细胞,用不同浓度梯度的鸢尾素干预INS-1细胞,根据蛋白结果筛选出最佳鸢尾素干预浓度为1500 ng/mL.然后将INS-1细胞分为正常组、PA组、PA+1500 ng/mL鸢尾素组、PA+1500 ng/mL鸢尾素+雷帕霉素组、PA+1500 ng/mL鸢尾素+3-MA组.用3.3 mmol/L和16.7 mmol/L的葡萄糖浓度刺激检测干预后胰岛素的分泌水平,Western blot检测自
【机 构】
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山西医科大学附属白求恩医院内分泌科,太原030032;山西医科大学附属白求恩医院内分泌科,太原030032;山西医科大学附属太原市中心医院内分泌代谢中心,太原030009;山西医科大学附属太原市中心医
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目的:探讨鸢尾素对棕榈酸(palmitic acid,PA)诱导的胰岛β细胞功能和凋亡的影响.方法:培养INS-1细胞,用不同浓度梯度的鸢尾素干预INS-1细胞,根据蛋白结果筛选出最佳鸢尾素干预浓度为1500 ng/mL.然后将INS-1细胞分为正常组、PA组、PA+1500 ng/mL鸢尾素组、PA+1500 ng/mL鸢尾素+雷帕霉素组、PA+1500 ng/mL鸢尾素+3-MA组.用3.3 mmol/L和16.7 mmol/L的葡萄糖浓度刺激检测干预后胰岛素的分泌水平,Western blot检测自噬相关蛋白p-mTOR、mTOR、p62、LC3Ⅱ、LC3 Ⅰ的蛋白水平,用mGFP-GFP-LC3腺病毒转染观察自噬流水平,流式细胞仪检测细胞凋亡水平.结果 采用SPSS 20.0软件进行统计分析,计量资料以均数±标准差((x)±s)表示,多组间差异比较采用单因素方差分析及Turkey HSD检验.结果 :①PA组LC3Ⅱ/Ⅰ的比值较正常组增高(0.745±0.035 vs.1.015±0.012,P=0.000),随着鸢尾素干预浓度增加,LC3Ⅱ/Ⅰ的水平较PA组逐渐升高且有统计学意义(Ⅰ1组1.465±0.028,Ⅰ2组2.269±0.063,I3组1.858±0.074,I4组2.355±0.074,均P=0.000),鸢尾素浓度为1500 ng/mL时LC3Ⅱ/Ⅰ的水平最高.②PA组INS-1细胞上清液中胰岛素水平在3.3 mmol/L和16.7 mmol/L葡萄糖刺激下较正常组均下降[(0.447±0.067) ng/mL vs.(0.138±0.012) ng/mL,P-0.000;(0.625±0.041) ng/mL vs.(0.245±0.043) ng/mL,P=0.000],鸢尾素干预后胰岛素水平较PA组均升高[(0.138±0.012) ng/mL vs.(0.322±0.041) ng/mL,P-0.001;(0.245±0.043) ng/mL vs.(0.414±0.036) ng/mL,P=0.005].③与正常组相比,PA干预细胞后,自噬体数量增加(2.33±1.53 vs.10.33±1.53,P=0.000),而自噬溶酶体数量无明显变化(2.33±1.53 vs.3.33±1.53,P=0.939),鸢尾素干预后,自噬体数量和自噬溶酶体数量较PA组均升高(10.33±1.53 vs.15.67±1.53,P=0.007;3.33±1.53 vs.12.00±2.00,P=0.001).④与正常组相比,PA干预后细胞凋亡率增加[(11.417±1.297)％ vs.(46.507±0.525)％,P=0.000],鸢尾素干预后凋亡率降低[(46.507±0.525)％ vs.(33.767±1.083)％,P=-0.000].结论:鸢尾素通过自噬改善PA诱导的INS-1细胞分泌功能和凋亡.
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