【摘 要】
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目的 研究姜叶三七挥发油(essential oil from Stahlianthus involucratus rhizomes,EOSIR)对氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用及机制.方法 实验采用ox-LDL诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)建立细胞损伤模型,分为空白对照组、模型组、EOSIR低、中、高剂量组(0.01、
【机 构】
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541000 桂林医学院药学院;中国人民解放军联勤保障部队第九〇八医院医疗保障中心
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目的 研究姜叶三七挥发油(essential oil from Stahlianthus involucratus rhizomes,EOSIR)对氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用及机制.方法 实验采用ox-LDL诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)建立细胞损伤模型,分为空白对照组、模型组、EOSIR低、中、高剂量组(0.01、0.05、0.10μg/mL)以及阿司匹林组.通过水蒸气蒸馏法提取EOSIR,采用GC-MS联用技术对EOSIR的成分进行分析.采用MTT法确定ox-LDL诱导HUVECs细胞损伤的最佳浓度与时间,分析EOSIR对ox-LDL诱导HUVECs细胞存活率的影响.Hoechst 33342染色实验观察EOSIR对ox-LDL诱导HUVECs细胞损伤形态的变化.JC-1染色实验观察EOSIR对ox-LDL诱导HUVECs细胞的线粒体膜电位变化的影响.ELISA法分析EOSIR对ox-LDL诱导HUVECs细胞内乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、一氧化氮(nitric oxide,NO)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)的含量影响.流式细胞术检测EOSIR对ox-LDL诱导HUVECs细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量以及细胞凋亡的影响.实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测EOSIR对ox-LDL诱导HUVECs细胞的核因子E2相关因子2(nuclear factory erythroid-2 related,Nrf2)、醌氧化还原酶1(NADPH quinone oxidoreductase 1,NQO1)、血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)、Bcl-2、Bax mRNA表达水平的影响.蛋白免疫印迹法(Western blot)检测EOSIR对ox-LDL诱导HUVECs细胞的Nrf2、NQO1、HO-1、Bcl-2、Bax蛋白表达水平的影响.结果(1)水蒸气蒸馏法提取得到的挥发油出油率为3.78％,GC-MS技术初步分析鉴定了EOSIR中54种化合物,占总挥发油含量的98.86％,其中含量最高的是莰烯,占22.38％;其次是 α-蒎烯,占16.11％;居第三位的是D-樟脑,占9.74％;第四位的是3,3,6,6-四甲基-3,6,7,8-四氢化-并茚-1(2H)-酮,占8.41％.(2)MTT结果显示:与空白对照组相比,EOSIR在0.01～60μg/mL时对正常的HUVECs细胞没有毒性,但大于80μg/mL时有明显的细胞毒性(P<0.01);在200μg/mL的ox-LDL诱导24小时条件下,HUVECs存活率为54.32％(P<0.01),以此作为造模的最佳条件;与模型组比较,EOSIR能显著抑制ox-LDL诱导的HUVECs细胞存活率下降(P<0.01).(3)Hoechst 33342染色结果显示:与空白对照组相比,模型组出现较强的蓝色荧光,给药EOSIR能明显减弱荧光强度并显著改善细胞损伤的形态.(4)JC-1染色结果显示,与空白对照组相比,模型组损伤的细胞表现出绿色荧光强度增强,红色荧光强度下降,给药EOSIR能减弱绿色荧光强度并增强红色荧光强度.(5)ELISA结果显示,与空白对照组相比,模型组的LDH、MDA含量升高,SOD、CAT、GSH-Px、NO的含量减少(P<0.05,P<0.01).给药EOSIR能降低LDH、MDA含量,升高SOD、CAT、GSH-Px、NO的含量(P<0.05,P<0.01).(6)流式细胞术结果发现,与空白对照组相比,模型组的ROS含量显著升高,凋亡率显著增加(P<0.05).给药EOSIR能显著下调ROS含量并降低细胞的凋亡率(P<0.05,P<0.01).(7)RT-qPCR分析表明,ox-LDL能诱导激活促凋亡基因Bax mRNA的表达,降低抗凋亡基因Bcl-2 mRNA的表达,并且降低Nrf2、NQO1、HO-1 mRNA的表达(P<0.01).EOSIR能显著下调Bax mRNA表达水平,上调Nrf2、NQO1、HO-1、Bcl-2 mRNA表达水平(P<0.05,P<0.01).(8)蛋白免疫印迹法结果表明,ox-LDL能诱导激活促凋亡蛋白Bax的表达水平,降低抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平,并且降低Nrf2、NQO1、HO-1蛋白表达水平(P<0.01).EOSIR能显著下调Bax蛋白表达水平,上调Nrf2、NQO1、HO-1、Bcl-2蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01).EOSIR抑制了ox-LDL诱导的HUVEC细胞毒性和凋亡.同时,EOSIR显著抑制了ox-LDL处理的细胞中ROS、LDH和MDA水平的增加,并增加了NO、SOD、CAT和GSH-Px水平.EOSIR上调了Nrf2、HO-1和NQO1的mRNA和蛋白表达水平.此外,EOSIR能够显著降低了与细胞凋亡相关的生化变化,例如MMP的丢失、Bax mRNA和蛋白质水平的下调以及ox-LDL处理的细胞中Bcl-2 mRNA和蛋白质水平的上调.结论 EOSIR能够通过调节线粒体依赖性细胞凋亡和激活Nrf2/ARE信号通路来预防ox-LDL诱导的内皮损伤.
其他文献
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目的 探讨基于危急值报告流程的优化护理对急诊就诊胸痛患者急救时间及护理工作满意度的影响.方法 选取驻马店市中心医院2020年3月至2021年3月收治的214例急诊就诊胸痛患者作为研究对象,依据护理方案分为两组,即研究组与对照组,每组107例.对照组接受传统护理,研究组在对照组基础上接受基于危急值报告流程的优化护理,统计两组急救效果(急救时间、急诊滞留时间、住院时间)、不良事件发生率、护理工作满意度以及入院时、转运后心理状况[焦虑自评量表(SAS)、抑郁自评量表(SDS)].结果 研究组住院时间、急诊滞留时
结直肠癌约占全球所有新发癌症病例的10％.肠道菌群与宿主细胞相互作用,调节许多生理过程,如能量获取、新陈代谢和免疫反应等.随着测序技术及动物模型的功能研究的开展,肠道菌群在结直肠癌发生发展中的作用越来越受到人们的重视,一系列研究发现,肠道菌群可能通过炎症、免疫调节及DNA损伤等影响结直肠癌的发生发展.越来越多的关于肠道菌群的研究为结直肠癌的诊断、筛查、预防、治疗及预后评估等临床实践提供了理论依据.
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