【摘 要】
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为鉴定Opsin3(OPN3)的糖基化位点,通过使用衣霉素(tunicamycin)以及N-糖酰胺酶F(PNGase F)处理发现OPN3存在糖基化修饰;通过预测以及蛋白质氨基酸位点点突变鉴定OPN3的糖基化位点;利用 SNAP标签蛋白构建了 SNAP-Opsin3(SNAP-OPN3)重组蛋白,使用SNAP-OPN3重组蛋白进行糖基化修饰对OPN3功能影响的研究.在表达SNAP-OPN3重组蛋白后,使用SNAP-tag的反应底物SNAP-Surface? 549以及SNAP-Cell? Oregon G
【机 构】
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贵州医科大学临床医学院病理学教研室,贵州贵阳550004;贵州医科大学附属医院临床医学研究中心,贵州贵阳550004;贵州医科大学附属医院临床医学研究中心,贵州贵阳550004;贵州医科大学临床医学院
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为鉴定Opsin3(OPN3)的糖基化位点,通过使用衣霉素(tunicamycin)以及N-糖酰胺酶F(PNGase F)处理发现OPN3存在糖基化修饰;通过预测以及蛋白质氨基酸位点点突变鉴定OPN3的糖基化位点;利用 SNAP标签蛋白构建了 SNAP-Opsin3(SNAP-OPN3)重组蛋白,使用SNAP-OPN3重组蛋白进行糖基化修饰对OPN3功能影响的研究.在表达SNAP-OPN3重组蛋白后,使用SNAP-tag的反应底物SNAP-Surface? 549以及SNAP-Cell? Oregon Green?通过荧光共聚焦显微镜观察OPN3以及OPN3糖基化位点突变体是否能够成熟转运至细胞膜.结果表明,OPN3的N82位点为OPN3的糖基化位点;SNAP标签不影响OPN3功能的正常发挥;使用SNAP反应底物可以清楚地观察到糖基化位点突变的OPN3不能正常转运至细胞膜.本研究首次鉴定了OPN3的糖基化位点,并构建了SNAP-OPN3重组蛋白,发现SNAP标签并不影响OPN3的成熟转运,并利用SNAP底物验证了糖基化修饰影响OPN3蛋白的成熟转运.
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