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【摘 要】 中分子羟乙基淀粉200/0.5是目前世界各国广泛应用于容量治疗和休克的血浆增量剂，由于结构和糖元接近，过敏性样反应发生率最低，近年评价较高，是一个副作用少、外科手术及危重病治疗中理想的血浆增量剂。羟乙基淀粉200/0.5原料药由高分支支链淀粉经酸水解、羟乙基化后制得，属中分子量低取代度羟乙基淀粉。化学名称为：聚（O-2-羟乙基）淀粉，通用名为羟乙基淀粉200/0.5。故对羟乙基淀粉的细菌内毒素及微生物进行研究。
【关键词】 羟乙基淀粉200/0.5 无菌 微生物 检查方法
【中图分类号】 R927.1 【文献标识码】 A 【文章编号】 1671-5160（2014）04-0320-01
1 供试品的无菌检查（和方法学验证同时进行）
1.1 无菌检查和方法学验证试验（中国药典2010年版二部附录XI H）
1.1 试剂来源
菌种 金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 枯草芽孢杆菌 白色念珠菌 黑曲霉（中国药品生物制品检定所） 培养基 营养琼脂培养基硫乙醇酸盐流体培养基 改良马丁琼脂培养基 玫瑰红钠琼脂培养基 胆盐乳糖培养基（北京陆达化学试剂厂）蛋白胨（石家庄同时实业有限公司）
1.2 试药来源
羟乙基淀粉200（批號：120301、120302、120303），由杭州中美华东制药有限公司提供；羟乙基淀粉200（批号：120401、120402、120403），由赤峰制药（集团）有限责任公司提供
1.3 仪器
MILLTPORE无菌检查薄膜过滤器；滤膜（上海医药工业研究院上海亚东核级树脂有限公司生产）
1.4 方法与结果
菌液制备 接种金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养琼脂培养基中，30～35℃培养18～24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁琼脂培养基中23～28℃培养24～48小时，上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数50-100cfu的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂培养基斜面培养基上，23～28℃培养5～7天，加入3～5ml0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后吸出孢子悬液至无菌试管内，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数50-100cfu的孢子悬液。
培养基接种 取每管量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基7支 ，分别接种小于100cfu的金黄色葡萄球海菌，大肠埃希菌，枯草芽孢杆菌各2支，另1支不接种作为空白对照，培养3天；取每管装量为9ml的改良马丁培养基5支，分别接种小于100cfu的白色念球菌、黑曲霉各2支，另1支不接种作为空白对照，培养5天。逐日观察结果。
结果判断 空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管生长良好，判断培养基的灵敏度检查符合规定。
供试品的无菌检查（和方法学验证同时进行）
直接接种法 取符合直接接种法培养基用量要求的硫乙醇酸盐流体培养基4管，分别接入小于100cfu的试验菌的金黄色葡萄球菌，枯草芽孢杆菌各2管；取符合直接接种法培养基用量要求的硫乙醇酸盐流体培养基4管，分别接入小于100cfu的试验菌的白色念珠菌 黑曲霉各2管。其中1管接入规定量的羟乙基淀粉200，另一管作为对照。
阳性对照试验 选择菌种金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 枯草芽孢杆菌 白色念珠菌，采用直接接种进行试验。含羟乙基淀粉200各容器中的试验菌生长良好。
阴性对照试验 取试验用的0.9%的无菌氯化钠溶液1ml，置无菌平皿中，注入培养基，凝固，倒置培养。每种计数用的培养基各制备2个平板，均无菌生长。
结果 与对照管比较，含羟乙基淀粉200各容器中的试验菌生长良好，则供试品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计，照此检验法和检查条件进行供试品的无菌检查。
2 微生物限度检查
2.1 方法与结果
菌数测定（平皿法） 取羟乙基淀粉200 2.5g，用0.9%的无菌氯化钠溶液配制成25ml溶液，取10.0ml用0.9%的无菌氯化钠溶液配制成100ml溶液用作10-1 级供试液；取1.0ml用0.9%的无菌氯化钠溶液配制成100ml溶液用作10-2 级供试液。取供试液1ml，置直径90mm的无菌平皿中，注入15～20ml温度不超过45℃的溶化的酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基，混匀，凝固，倒置培养。每稀释级每种培养基制备2个平板。
培养和计数 细菌培养48小时，逐日点计菌落数；霉菌、酵母菌培养72小时，每48小时点计菌落数。点计菌落数后，计算各稀释级供试液的平均菌落数，按菌数报告规则报告菌数。
结果见表2-1，2-2。
表2-1 微生物限度检测结果
表2-2 微生物限度检测结果
3 结论
羟乙基淀粉200/0.5用上述方法测定，方法可行，通过供试品试验，结果符合规定。
参考文献
[1]中国药典2010年版二部
[2]徐立宏 羟乙基淀粉的制备与应用 粮食与饲料工业 2001，11
[3]日本药局方医药外成品规格1997年版
[4]国家药品工作手册
[5]吴翠栓 羟乙基淀粉130/0.4的研究进展 中国新药杂志 2005，8：36-39
【关键词】 羟乙基淀粉200/0.5 无菌 微生物 检查方法
【中图分类号】 R927.1 【文献标识码】 A 【文章编号】 1671-5160（2014）04-0320-01
1 供试品的无菌检查（和方法学验证同时进行）
1.1 无菌检查和方法学验证试验（中国药典2010年版二部附录XI H）
1.1 试剂来源
菌种 金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 枯草芽孢杆菌 白色念珠菌 黑曲霉（中国药品生物制品检定所） 培养基 营养琼脂培养基硫乙醇酸盐流体培养基 改良马丁琼脂培养基 玫瑰红钠琼脂培养基 胆盐乳糖培养基（北京陆达化学试剂厂）蛋白胨（石家庄同时实业有限公司）
1.2 试药来源
羟乙基淀粉200（批號：120301、120302、120303），由杭州中美华东制药有限公司提供；羟乙基淀粉200（批号：120401、120402、120403），由赤峰制药（集团）有限责任公司提供
1.3 仪器
MILLTPORE无菌检查薄膜过滤器；滤膜（上海医药工业研究院上海亚东核级树脂有限公司生产）
1.4 方法与结果
菌液制备 接种金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养琼脂培养基中，30～35℃培养18～24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁琼脂培养基中23～28℃培养24～48小时，上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数50-100cfu的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂培养基斜面培养基上，23～28℃培养5～7天，加入3～5ml0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后吸出孢子悬液至无菌试管内，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数50-100cfu的孢子悬液。
培养基接种 取每管量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基7支 ，分别接种小于100cfu的金黄色葡萄球海菌，大肠埃希菌，枯草芽孢杆菌各2支，另1支不接种作为空白对照，培养3天；取每管装量为9ml的改良马丁培养基5支，分别接种小于100cfu的白色念球菌、黑曲霉各2支，另1支不接种作为空白对照，培养5天。逐日观察结果。
结果判断 空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管生长良好，判断培养基的灵敏度检查符合规定。
供试品的无菌检查（和方法学验证同时进行）
直接接种法 取符合直接接种法培养基用量要求的硫乙醇酸盐流体培养基4管，分别接入小于100cfu的试验菌的金黄色葡萄球菌，枯草芽孢杆菌各2管；取符合直接接种法培养基用量要求的硫乙醇酸盐流体培养基4管，分别接入小于100cfu的试验菌的白色念珠菌 黑曲霉各2管。其中1管接入规定量的羟乙基淀粉200，另一管作为对照。
阳性对照试验 选择菌种金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 枯草芽孢杆菌 白色念珠菌，采用直接接种进行试验。含羟乙基淀粉200各容器中的试验菌生长良好。
阴性对照试验 取试验用的0.9%的无菌氯化钠溶液1ml，置无菌平皿中，注入培养基，凝固，倒置培养。每种计数用的培养基各制备2个平板，均无菌生长。
结果 与对照管比较，含羟乙基淀粉200各容器中的试验菌生长良好，则供试品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计，照此检验法和检查条件进行供试品的无菌检查。
2 微生物限度检查
2.1 方法与结果
菌数测定（平皿法） 取羟乙基淀粉200 2.5g，用0.9%的无菌氯化钠溶液配制成25ml溶液，取10.0ml用0.9%的无菌氯化钠溶液配制成100ml溶液用作10-1 级供试液；取1.0ml用0.9%的无菌氯化钠溶液配制成100ml溶液用作10-2 级供试液。取供试液1ml，置直径90mm的无菌平皿中，注入15～20ml温度不超过45℃的溶化的酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基，混匀，凝固，倒置培养。每稀释级每种培养基制备2个平板。
培养和计数 细菌培养48小时，逐日点计菌落数；霉菌、酵母菌培养72小时，每48小时点计菌落数。点计菌落数后，计算各稀释级供试液的平均菌落数，按菌数报告规则报告菌数。
结果见表2-1，2-2。
表2-1 微生物限度检测结果
表2-2 微生物限度检测结果
3 结论
羟乙基淀粉200/0.5用上述方法测定，方法可行，通过供试品试验，结果符合规定。
参考文献
[1]中国药典2010年版二部
[2]徐立宏 羟乙基淀粉的制备与应用 粮食与饲料工业 2001，11
[3]日本药局方医药外成品规格1997年版
[4]国家药品工作手册
[5]吴翠栓 羟乙基淀粉130/0.4的研究进展 中国新药杂志 2005，8：36-39