【摘 要】
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旨在建立一种SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测牛轮状病毒(BRV)的方法,并采用针对BRV vp6基因序列保守区设计的引物,使用RT-qPCR方法进行目的基因扩增,优化反应条件
【机 构】
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黑龙江八一农垦大学动物科技学院,中国农业科学院哈尔滨兽医研究所牛羊传染病研究创新团队
【基金项目】
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兽医生物技术国家重点实验室开放课题基金项目(SKLVBF2018XX),黑龙江八一农垦大学自然科学人才支持计划项目(ZRCPY201807),农垦总局攻关项目(HNK135-04-02-02)
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旨在建立一种SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测牛轮状病毒(BRV)的方法,并采用针对BRV vp6基因序列保守区设计的引物,使用RT-qPCR方法进行目的基因扩增,优化反应条件,制备阳性标准品,建立标准曲线,确定重复性、敏感性和特异性,与常规PCR方法比较。结果显示,建立的RT-qPCR方法最佳引物浓度为5μmol/L,退火温度为58℃,40个循环,熔解温度为77℃±0.5℃,最小检出量8.13copies/μL。两种方法检出率分别为30.4%和19.6%,RT-qP
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