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谷氨酸棒状杆菌作为重要的微生物细胞工厂，基因组修饰已经成为调节目标代谢物的首要途径。为了提高基因定点突变的编辑效率，建立了高效省时的CRISPR-Cpf1/ssDNA基因组编辑系统。利用卡那霉素抗性作为筛选标记，构建了一株严谨的单链模式菌M-1，用于验证与统计编辑效率；首先，采用强启动子Ptuf，优化了切割效率；其次，利用重组酶RecT和合理长度与添加量的ssDNA，优化了重组效率。实验结果显示：在启动子Ptuf和RecT的双重作用下，采用滞后链（70 bp、12.5 μg）优化组合方式，使基因编辑效率提升至80%±5.7%。由RecT介导的CRISPR-Cpf1/ssDNA基因组编辑系统可在很大程度上加快谷氨酸棒状杆菌代谢工程改造。