【摘 要】
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目的克隆、表达人67KDa层连蛋白受体前体蛋白(67KDa laminin receptor precursor,LRP)并检测其免疫原性.方法应用RT-PCR从胃癌细胞SGC7901中扩增编码LRP的cDNA,将其按照T-A克
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目的克隆、表达人67KDa层连蛋白受体前体蛋白(67KDa laminin receptor precursor,LRP)并检测其免疫原性.方法应用RT-PCR从胃癌细胞SGC7901中扩增编码LRP的cDNA,将其按照T-A克隆法重组入pUCm-T载体并进行DNA序列测定.采用DNA重组技术构建原核表达载体pQE30-LRP;用M15/pQE系统表达6×组氨酸与LRP的融合蛋白,并以SDS-PAGE和Western blot鉴定所获融合蛋白.用含融合蛋白的聚丙烯酰胺凝胶颗粒免疫小鼠,以Western blot检测小鼠血清的抗体活性.结果 DNA测序结果证实所扩增的cDNA片段与LRP的基因序列完全相符.SDS-PAGE检测显示,经IPTG诱导2h后,M15/pQE30-LRP总蛋白中出现一条34KDa的新生蛋白带,Western blot进一步证实该新生蛋白为融合蛋白.其免疫小鼠血清经Western blot检测仅识别SGC7901细胞中一条大小约为42KDa的蛋白带;其血清即使被稀释2000倍,仍然显示与靶蛋白有较强的结合活性.结论成功地克隆、表达了人LRP,并具有良好的免疫原性.
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