【摘 要】
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为能一步快速检测沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和单增李斯特菌3种食源性致病菌,建立了三重环介导等温扩增(LAMP)检测方法.针对沙门氏菌的侵袭蛋白(invA)基因、金黄色葡萄球菌的
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为能一步快速检测沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和单增李斯特菌3种食源性致病菌,建立了三重环介导等温扩增(LAMP)检测方法.针对沙门氏菌的侵袭蛋白(invA)基因、金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶(nuc)基因、单增李斯特菌(hly)基因3个高度保守的基因,设计出3套LAMP引物.以8株代表目标菌株,三重LAMP反应体系中Mg2+浓度4.6mmol/L、扩增温度61℃.通过电泳检测、离心观察沉淀和荧光检测证明该方法能够在90min内一次性检出以上3种致病菌.3种菌的检测灵敏度均约为10fg/μL,是PCR检测灵敏度(10pg/μL)的1000倍.以无害李斯特菌等常见的20株非目标菌株为对照,证明了此方法的特异性.LAMP产物DNA测序结果与预期一致,证明了该方法的正确性.该三重LAMP检测方法具有快速、特异、灵敏度高的优点,适用于食品中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和单增李斯特菌的快速检测.
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