【摘 要】
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目的研究雷替曲塞对微卫星高度不稳定性(MSI-H)结肠癌细胞株LOVO增殖、凋亡的作用及分子机制。方法取对数生长期的MSI-H结肠癌细胞株LOVO细胞,经10%FBS的DMEM完全培养基培养
【机 构】
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南通大学附属南京江北人民医院肿瘤科南通大学肿瘤转化医学研究所,
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目的研究雷替曲塞对微卫星高度不稳定性(MSI-H)结肠癌细胞株LOVO增殖、凋亡的作用及分子机制。方法取对数生长期的MSI-H结肠癌细胞株LOVO细胞,经10%FBS的DMEM完全培养基培养后,分别加至60μM雷替曲塞(雷替曲塞组)和2μg/ml 5-氟尿嘧啶(5-FU)(5-FU组)的完全培养基培养,同时设置不加药物的空白对照组。采用CCK-8法检测雷替曲塞及5-FU对LOVO细胞增殖的影响;采用FITC-Annexin V-PI染色法和流式细胞仪检测雷替曲塞及5-FU作用于LOVO细胞24 h后对细胞凋亡的影响;Western Blot法检测雷替曲塞及5-FU作用24 h后凋亡相关蛋白-B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶3前体(Pre-caspase 3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved-caspase 3)等蛋白在LOVO细胞中的表达水平。结果CCK-8法细胞增殖实验检测结果显示,与对照组比较,雷替曲塞作用后细胞的增殖明显受到抑制,其中在72 h最明显(P均<0.05),而5-FU组无变化(P>0.05)。FITC-Annexin V-PI染色结果显示,与对照组及5-FU组相比,雷替曲塞作用于LOVO细胞24 h后,细胞早期凋亡数目和晚期凋亡数目均增加,差异有统计学意义(P均<0.05)。流式细胞术检测显示,与对照组比较,雷替曲塞组的细胞凋亡率明显增高(P<0.05),5-FU组无变化(P>0.05)。Western Blot检测结果显示雷替曲塞组的促凋亡蛋白cleaved-caspase3、Bax蛋白的表达水平明显增加,而抑制凋亡蛋白Bcl-2、Pre-caspase3蛋白表达水平明显降低(P均<0.05)。结论雷替曲塞可促进MSI-H结肠癌细胞的凋亡,为雷替曲塞对结肠癌的治疗提供了参考依据。
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