探讨乙型肝炎病毒X蛋白(HBx蛋白)对核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体活性的影响及其促进HBV相关性肝细胞肝癌(HCC)的作用机制。

采用实验研究方法。将HepG2细胞株分为5组：空白对照组(未转染质粒)，空载质粒组[转染pE绿色荧光蛋白(GFP)-N1空载质粒]，全长HBx蛋白组(转染pEGFP-N1-X质粒)，HBx^1-127组(转染pEGFP-N1-X^1-127质粒)，HBx^1-101组(转染pEGFP-N1-X^1-101质粒)。(1)采用Western blot检测HBx蛋白和NLRP3炎性小体蛋白[采用脂多糖＋ATP干预空白对照组HepG2细胞]的表达。(2)分别采用格列本脲、吡咯烷二硫代甲酸铵盐(APDC)干预全长HBx蛋白HepG2细胞，采用ELISA检测IL-1β和IL-18的表达。(3)采用流式细胞仪检测活性氧的表达。正态分布的计量资料以

±s表示，多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用t检验。

(1)Western blot检测结果显示：①空白对照组、空载质粒组、全长HBx蛋白组、HBx^1-127组、HBx^1-101组HepG2细胞中HBx重组质粒融合蛋白的相对表达量分别为0.07±0.03、0.92±0.13、0.84±0.11、0.30±0.06、0.29±0.05，其中HBx^1-127组和HBx^1-101组HepG2细胞中分别为HBx^1-127蛋白和HBx^1-101蛋白的表达。5组比较，差异有统计学意义(F＝61.790，P<0.05)。其中全长HBx蛋白组分别与空白对照组、HBx^1-127组、HBx^1-101组比较，差异均有统计学意义(t＝12.070，7.465，7.801，P<0.05)；全长HBx蛋白组与空载质粒组比较，差异无统计学意义(t＝0.867，P>0.05)；HBx^1-127组和HBx^1-101组比较，差异无统计学意义(t＝0.146，P>0.05)。②空白对照组、全长HBx蛋白组、HBx^1-127组、HBx^1-101组、脂多糖＋ATP组HepG2细胞中NLRP3炎性小体蛋白的相对表达量分别为0.29±0.06、0.83±0.14、0.27±0.06、0.27±0.05、0.90±0.16，5组比较，差异有统计学意义(F＝29.550，P<0.05)。其中脂多糖＋ATP组分别与空白对照组、HBx^1-127组、HBx^1-101组比较，差异均有统计学意义(t＝6.310，6.565，6.741，P<0.05)；全长HBx蛋白组分别与HBx^1-127组、HBx^1-101组比较，差异均有统计学意义(t＝6.381，6.584，P<0.05)；脂多糖＋ATP组与全长HBx蛋白组比较，差异无统计学意义(t＝0.580，P>0.05)。(2)ELISA检测结果显示：①空白对照组、全长HBx蛋白组、HBx^1-127组、HBx^1-101组、脂多糖＋ATP组HepG2细胞中IL-1β的表达量分别为(87±9)pg/mL、(587±56)pg/mL、(125±12)pg/mL、(113±13)pg/mL、(677±74)pg/mL，IL-18的表达量分别为(43±8)pg/mL、(252±38)pg/mL、(70±13)pg/mL、(63±10)pg/mL、(263±48)pg/mL。HepG2细胞中IL-1β的表达量5组比较，差异有统计学意义(F＝139.010，P<0.05)；其中脂多糖＋ATP组分别与空白对照组、HBx^1-127组、HBx^1-101组比较，差异均有统计学意义(t＝13.691，12.752，13.001，P<0.05)；全长HBx蛋白组分别与HBx^1-127组、HBx^1-101组比较，差异均有统计学意义(t＝14.051，14.283，P<0.05)；脂多糖＋ATP组与全长HBx蛋白组比较，差异无统计学意义(t＝1.691，P>0.05)。HepG2细胞中IL-18的表达量5组比较，差异有统计学意义(F＝44.010，P<0.05)；其中脂多糖＋ATP组分别与空白对照组、HBx^1-127组、HBx^1-101组比较，差异均有统计学意义(t＝7.848，6.722，7.065，P<0.05)；全长HBx蛋白组分别与HBx^1-127组、HBx^1-101组比较，差异均有统计学意义(t＝7.882，8.331，P<0.05)；脂多糖＋ATP组与全长HBx蛋白组比较，差异无统计学意义(t＝0.326，P>0.05)。②加格列本脲前、后全长HBx蛋白HepG2细胞中IL-1β的表达量分别为(587±91)pg/mL、(115±17)pg/mL，两者比较，差异有统计学意义(t＝8.800，P<0.05)。加格列本脲前、后全长HBx蛋白HepG2细胞中IL-18的表达量分别为(243±22)pg/mL、(90±12)pg/mL，两者比较，差异有统计学意义(t＝10.566，P<0.05)。加APDC前、后全长HBx蛋白HepG2细胞中IL-1β的表达量分别为(573±89)pg/mL、(124±21)pg/mL，两者比较，差异有统计学意义(t＝8.516，P<0.05)。加APDC前、后全长HBx蛋白HepG2细胞中IL-18的表达量分别为(252±24)pg/mL、(116±15)pg/mL，两者比较，差异有统计学意义(t＝8.269，P<0.05)。(3)流式细胞仪检测结果显示：空白对照组、全长HBx蛋白组、脂多糖＋ATP组HepG2细胞中活性氧的相对表达量分别为66±14、275±54、388±88，3组比较，差异有统计学意义(F＝22.130，P<0.05)；其中全长HBx蛋白组和脂多糖＋ATP组分别与空白对照组比较，差异均有统计学意义(t＝6.489，6.256，P<0.05)；全长HBx蛋白组和脂多糖＋ATP组比较，差异无统计学意义(t＝1.887，P>0.05)。

HBx蛋白通过诱导HepG2细胞内活性氧的产生，进而激活NLRP3炎性小体，可能在HBV相关性HCC的发生发展过程中发挥重要作用。