【摘 要】
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目的:通过检测耐药绒癌细胞内自噬的变化,以及评估抑制自噬或敲除自噬相关基因后细胞凋亡情况,探讨细胞自噬在耐药绒癌中的作用。方法:以人绒毛膜上皮癌JEG-3细胞及本课题组
【机 构】
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国家人口计生委科学技术研究所,中国医学科学院北京协和医院妇产科,
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目的:通过检测耐药绒癌细胞内自噬的变化,以及评估抑制自噬或敲除自噬相关基因后细胞凋亡情况,探讨细胞自噬在耐药绒癌中的作用。方法:以人绒毛膜上皮癌JEG-3细胞及本课题组前期构建的甲氨蝶呤(MTX)耐药绒癌JEG-3/MTXR细胞为研究对象。采用透射电镜、免疫荧光法观察MTX处理后细胞内自噬的变化;Western blot法检测自噬相关蛋白LC3、Beclin-1的表达变化。RNA干扰法沉默自噬相关基因LC3后,采用Western blot法和Annexin-Ⅴ/PI双染法流式细胞仪检测MTX作用后JEG-3/MTXR耐药绒癌细胞凋亡的变化。结果:透射电镜和荧光显微镜下均可观察到MTX处理后JEG-3、JEG-3/MTXR细胞内自噬小体的产生;IC30浓度MTX处理后,两种细胞内自噬相关蛋白LC3、Beclin-1表达水平上调。相同浓度MTX处理后,JEG-3细胞内LC3、Beclin-1表达下调。沉默自噬相关基因LC3后,沉默LC3联合MTX组的JEG-3/MTXR和JEG-3细胞内凋亡相关蛋白caspase-9表达上调,凋亡率显著增多。结论:MTX可诱导耐药绒癌产生保护性自噬。
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