【摘 要】
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目的 构建分枝杆菌可控表达载体,利用其过表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tu-berculosis,Mtb)的免疫保护性抗原,亲和层析纯化后分析免疫原性.方法 应用PCR扩增耻垢分枝杆菌(
【机 构】
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201508,复旦大学附属上海市公共卫生临床中心200433上海,复旦大学生命科学学院微生物系;复旦大学生命科学学院微生物系,上海,200433;复旦大学附属上海市公共卫生临床中心,201508;上海
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目的 构建分枝杆菌可控表达载体,利用其过表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tu-berculosis,Mtb)的免疫保护性抗原,亲和层析纯化后分析免疫原性.方法 应用PCR扩增耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,Ms)乙酰胺酶编码基因启动子(pACE),构建分枝杆菌可控表达载体pMF系列;克隆Mtb嵌合抗原编码基因并用乙酰胺进行诱导表达,以Ni~(2+)亲和层析纯化重组蛋白;并用该重组嵌合抗原Ag856A2对卡介苗(BCG)免疫的小鼠脾细胞进行体外刺激,以IFN-γ酶联免疫斑点技术(ELISPOT)分析其免疫原性.结果 成功构建了分枝杆菌可控表达载体pMF系列,利用0.02%乙酰胺进行诱导可实现目标抗原在Ms中的高水平表达;同时利用引入的6×His标签可方便实现重组抗原的一步纯化,且该同源表达重组抗原可诱导更高水平IFN-γ的分泌.结论 以Ms乙酰胺酶编码基因启动子pACE为基础构建的分枝杆菌可控表达系统可实现Mtb抗原在Ms中的高水平表达与纯化,与大肠杆萧异源表达相比,该同源表达重组抗原具有更好的免疫原性.
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