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目的探讨骨膜成骨细胞分离培养的最佳方法，为骨组织工程的研究提供稳定可靠的种子细胞来源. 方法分别以组织块法、酶消化法和联合法分离培养兔骨膜成骨细胞，观察原代培养的成功率、细胞生长曲线、成骨细胞的表型特征. 结果组织块法原代培养耗时较长，成功率低；酶消化法细胞增殖快但有大量的杂细胞掺入；联合法提高了组织块成活率，并维持了较高的成骨细胞表型. 结论胶原酶短时预消化的联合法能够在较短时间内获得高纯度的成骨细胞，效果优于传统的组织块法和酶消化法，有望成为骨组织工程种子细胞培养的常规方法.