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目的
建立一种灵敏且特异的实时荧光定量RT-PCR方法,用于快速检测盖塔病毒(getah virus, GETV)。
方法从GenBank数据库下载GETV基因序列,使用Clustal X完成序列比对,针对高保守区段设计特异性引物和探针;以GETV核酸为标准品建立标准曲线,分别对检测反应的灵敏度、特异性和稳定性进行评价。
结果本方法能特异地检测GETV,与多种虫媒病毒无交叉反应;灵敏度为1.0×10 pfu/ml,批内和批间变异系数均小于1%。从湖南、河北、福建、重庆采集的196批蚊虫中检出1批GETV阳性。
结论建立了灵敏度高,特异性强的TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR方法用于GETV筛查。