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摘 要 目的：观察罗布麻叶对高血压大鼠血压及免疫的影响。方法：降血压实验，经口给予自发性高血压（SHR）大鼠不同剂量的罗布麻叶，设三个剂量组、空白对照组和高剂量正常组，连续灌胃30天。检测并比较各组大鼠血压、心率。免疫实验，灌胃给予KM小鼠不同剂量罗布麻叶，设三个剂量组和一个阴性对照组。连续灌胃30天后，处死小鼠进行细胞免疫、体液免疫、单核-巨噬细胞吞噬功能指标、NK细胞活性测定。结果 罗布麻叶具有增强动物免疫力、降低高血压大鼠血压的作用。
关键词罗布麻叶;免疫;血压;大鼠;小鼠
罗布麻（ Apocynum venetum L.） 是夹竹桃科多年生宿根性草本植物，自然分布在中国西北的新疆、青海、甘肃、内蒙、宁夏等部分地区，有很高的药用价值[1]。羅布麻叶罗布麻叶中主要含有黄酮类、鞣质、低分子有机酸类、长链脂肪酸酯、醇类、甾体类等成分。本草纲目记载其有平心悸、止眩晕、消喘止咳、强心利尿之功能。中国药典记载其清热利水、平肝安神， 用于高血压、头晕、心悸、失眠。现代研究表明， 罗布麻叶具有降血压、降血脂、增强免疫力、抗焦虑、保护肝脏等多种功效[2-4]。本实验观察罗布麻叶对高血压大鼠的降压作用及其对正常小鼠免疫功能的影响。
实验材料
1.1 动物 SHR雄性大鼠48只，SPF级，体重180～220g;Wistar大鼠12只，清洁级，雄性，体重180～220g，用于降血压功能实验。SPF级ICR雄性小鼠，160只，体重18～22g，用于增强免疫力功能实验。大鼠、小鼠均由上海斯莱克实验动物有限公司提供。
1.2 受试物罗布麻叶产地新疆罗布。罗布麻叶用10倍85℃热水浸泡40min，浸泡2次，收集滤液。于70℃浓缩成浸膏，浸膏以纯化水稀释至相对应浓度进行灌胃。降血压实验，浓缩浸膏加纯水分别稀释至含药材100mg/ml、50mg/ml和25mg/ml进行大鼠灌胃。增强免疫实验。浓缩浸膏加纯水分别稀释至含药材50mg/ml、17mg/ml和8.5mg/ml的浓度进行小鼠灌胃。
1.3 仪器 BP-98A型血压测量仪、酶标仪、分光光度仪、二氧化碳培养箱、电子分析天平、离心机、微量注射器等。
1.4 分组及剂量 降血压实验，以高血压大鼠设低、中、高剂量组（100mg/ml、50mg/ml和25mg/ml）和高血压空白组，同时设正常大鼠高剂量组（100mg/ml）。高血压剂量组和正常大鼠高剂量组以相对应浓度罗布麻叶浸膏稀释液灌胃，高剂量空白组灌胃等体积纯化水，灌胃体积为10ml/kg。连续30天。每周测1次血压。
增强免疫功能实验，160只小鼠分为四个大组每组40只。A组用于小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验;B组用于NK细胞活性测定及淋巴细胞转化实验;C组用于抗体生成细胞实验、血清溶血素测定和迟发性变态反应实验; D组用于小鼠碳廓清实验。大组再分成4个小组，每组10只。设高、中、低三个剂量组（50mg/ml、17mg/ml和8.5mg/ml）和阴性对照组。三个剂量组分别灌胃对应浓度的罗布麻叶浸膏稀释液，阴性对照组灌胃纯化水，灌胃体积20ml/kg。连续灌胃30天，处死小鼠进行相关指标测定。
方法
2.1实验方法 按照《保健食品检验与评价技术规范》（ 2003 版）中“辅助降血压功能检测方法-动物实验”及“增强免疫力功能实验”有关方法进行。辅助降血压功能进行动物的体重、血压和心率测定;增强免疫力功能实验内容实包括：细胞免疫功能、单核-巨噬细胞功能、体液免疫功能、NK细胞活性四个方面。
2.2统计分析： 试验数据采用SPSS 17.0软件包进行分析。对照组与剂量组的比较用方差分析，如方差齐，则用SNK法进行两两比较;若方差不齐，则Dunnett’s T3 法进行两两比较，显著性水平P≤0.05。
结果
3.1降血压实验结果
3.1.1对大鼠体重的影响 试验初始及实验期间动物体重、体重正常增长，各组动物体重的差异无统计学意义（P>0.05）。
3.1.2对大鼠血压的影响 由表1可见，前面三周各剂量大鼠血压与高血压空白组比较无明显变化，第四周中、高剂量组大鼠血压较高血压空白组显著下降，差异有统计学意义（P<0.05）。正常大鼠给予高剂量罗布麻叶，实验过程中血压无明显变化。
3.1.3对大鼠心率的影响 由表2可见，整个实验过程，各剂量大鼠、空白组和正常高剂量组大鼠心率均无明显变化，各剂量组大鼠心率与高血压空白组大鼠比较无明显变化，无统计学意义（P>0.05）。
3.2增强免疫力实验结果
3.2.1对小鼠体重的影响 试验初期、中期、末期各剂量组小鼠体重，与阴性对照组比较无明显变化，差异无统计学意义（P>0.05）。
3.2.2对小鼠脾脏/体重、胸腺/体重比值：连续灌胃30天后，各剂量组小鼠脾脏/体重比值、胸腺/体重比值与阴性对照组比较，无显著性差异（P>0.05）。
3.2.3对小鼠细胞免疫的影响 连续灌胃30天后，中，高剂量组小鼠的耳壳增重显著高于对照组（表3，P<0.05，P<0.01）;三个剂量组小鼠的淋巴细胞增殖能力与对照组相比，无显著性差异（表3，P>0.05）。
3.2.3对小鼠体液免疫功能： 与阴性对照组比较，各剂量组小鼠溶血空斑数，无明显变化，差异无统计学意义（表4，P>0.05）;中、高剂量组小鼠的血清溶血素值显著高于与对照组;差异有统计学意义（表4，P<0.05）。
3.2.4.小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能：三个剂量组小鼠的单核-巨噬细胞碳廓清吞噬指数与阴性对照组相比，无显著性差异（表5，P>0.05）;中、高剂量组小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞指数较阴性对照组明显升高，差异有统计学意义表5，P<0.05）。
3.2.5.小鼠NK细胞活性的影响：三个剂量组小鼠的NK细胞活性与对阴性照组相比，无显著性差异（表6，P>0.05）。
讨论
以上实验显示，罗布麻叶对高血压大鼠具有降压作用，对正常大鼠血压、心率均无影响;罗布麻叶还可以增强小鼠迟发型变态反应、增加小鼠血清溶血数值、可提高巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬能力。对实验数据进一步分析发现，降血压实验：第二周开始罗布麻叶对高血压大鼠逐渐有影响，慢慢的下降，第四周时中剂量组、高剂量组大鼠的血压较高血压空白组明显低，具有显著性差异，且具有一定的剂量量效关系。说明罗布麻叶达到50mg/ml（折合药材0.5g/kg）可以降低高血压大鼠的血压。增强免疫力实验：低剂量组所有指标均体现与阴性对照无显著性差异，中剂量、高剂量显示在迟发型变态反应（耳壳增重）、血清溶血数值、巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬指数较阴性对照组，具有显著增加。说明罗布麻叶达到17mg/ml（折合药材0.33g/kg）可以增强小鼠免疫力。罗布麻叶具有增强动物免疫力、降低高血压动物血压的作用，降低血压剂量要求较高。
引用文献
1.赵晓娟，胡律江，郭慧玲，等.罗布麻药理作用研究进展.江西中医药.2014年 10月，第10期总45卷第382期：76-78
2.李庆华，魏春雁，李建东，等.罗布麻叶药理作用及临床应用研究进展.中药材.第 2008年5月，31卷第5期 ：784-787
3.周本宏，刘刚，胡先明，等.罗布麻对红细胞膜脂质过氧化损伤的保护作用.广东药学院学报， 2004， 20（5）： 506-508
4.苏冬梅，岳常青， 吕锐，等.罗布麻对耐药性菌株R质粒的作用.青岛大学医学院学报，2005，41（4）：352
关键词罗布麻叶;免疫;血压;大鼠;小鼠
罗布麻（ Apocynum venetum L.） 是夹竹桃科多年生宿根性草本植物，自然分布在中国西北的新疆、青海、甘肃、内蒙、宁夏等部分地区，有很高的药用价值[1]。羅布麻叶罗布麻叶中主要含有黄酮类、鞣质、低分子有机酸类、长链脂肪酸酯、醇类、甾体类等成分。本草纲目记载其有平心悸、止眩晕、消喘止咳、强心利尿之功能。中国药典记载其清热利水、平肝安神， 用于高血压、头晕、心悸、失眠。现代研究表明， 罗布麻叶具有降血压、降血脂、增强免疫力、抗焦虑、保护肝脏等多种功效[2-4]。本实验观察罗布麻叶对高血压大鼠的降压作用及其对正常小鼠免疫功能的影响。
实验材料
1.1 动物 SHR雄性大鼠48只，SPF级，体重180～220g;Wistar大鼠12只，清洁级，雄性，体重180～220g，用于降血压功能实验。SPF级ICR雄性小鼠，160只，体重18～22g，用于增强免疫力功能实验。大鼠、小鼠均由上海斯莱克实验动物有限公司提供。
1.2 受试物罗布麻叶产地新疆罗布。罗布麻叶用10倍85℃热水浸泡40min，浸泡2次，收集滤液。于70℃浓缩成浸膏，浸膏以纯化水稀释至相对应浓度进行灌胃。降血压实验，浓缩浸膏加纯水分别稀释至含药材100mg/ml、50mg/ml和25mg/ml进行大鼠灌胃。增强免疫实验。浓缩浸膏加纯水分别稀释至含药材50mg/ml、17mg/ml和8.5mg/ml的浓度进行小鼠灌胃。
1.3 仪器 BP-98A型血压测量仪、酶标仪、分光光度仪、二氧化碳培养箱、电子分析天平、离心机、微量注射器等。
1.4 分组及剂量 降血压实验，以高血压大鼠设低、中、高剂量组（100mg/ml、50mg/ml和25mg/ml）和高血压空白组，同时设正常大鼠高剂量组（100mg/ml）。高血压剂量组和正常大鼠高剂量组以相对应浓度罗布麻叶浸膏稀释液灌胃，高剂量空白组灌胃等体积纯化水，灌胃体积为10ml/kg。连续30天。每周测1次血压。
增强免疫功能实验，160只小鼠分为四个大组每组40只。A组用于小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验;B组用于NK细胞活性测定及淋巴细胞转化实验;C组用于抗体生成细胞实验、血清溶血素测定和迟发性变态反应实验; D组用于小鼠碳廓清实验。大组再分成4个小组，每组10只。设高、中、低三个剂量组（50mg/ml、17mg/ml和8.5mg/ml）和阴性对照组。三个剂量组分别灌胃对应浓度的罗布麻叶浸膏稀释液，阴性对照组灌胃纯化水，灌胃体积20ml/kg。连续灌胃30天，处死小鼠进行相关指标测定。
方法
2.1实验方法 按照《保健食品检验与评价技术规范》（ 2003 版）中“辅助降血压功能检测方法-动物实验”及“增强免疫力功能实验”有关方法进行。辅助降血压功能进行动物的体重、血压和心率测定;增强免疫力功能实验内容实包括：细胞免疫功能、单核-巨噬细胞功能、体液免疫功能、NK细胞活性四个方面。
2.2统计分析： 试验数据采用SPSS 17.0软件包进行分析。对照组与剂量组的比较用方差分析，如方差齐，则用SNK法进行两两比较;若方差不齐，则Dunnett’s T3 法进行两两比较，显著性水平P≤0.05。
结果
3.1降血压实验结果
3.1.1对大鼠体重的影响 试验初始及实验期间动物体重、体重正常增长，各组动物体重的差异无统计学意义（P>0.05）。
3.1.2对大鼠血压的影响 由表1可见，前面三周各剂量大鼠血压与高血压空白组比较无明显变化，第四周中、高剂量组大鼠血压较高血压空白组显著下降，差异有统计学意义（P<0.05）。正常大鼠给予高剂量罗布麻叶，实验过程中血压无明显变化。
3.1.3对大鼠心率的影响 由表2可见，整个实验过程，各剂量大鼠、空白组和正常高剂量组大鼠心率均无明显变化，各剂量组大鼠心率与高血压空白组大鼠比较无明显变化，无统计学意义（P>0.05）。
3.2增强免疫力实验结果
3.2.1对小鼠体重的影响 试验初期、中期、末期各剂量组小鼠体重，与阴性对照组比较无明显变化，差异无统计学意义（P>0.05）。
3.2.2对小鼠脾脏/体重、胸腺/体重比值：连续灌胃30天后，各剂量组小鼠脾脏/体重比值、胸腺/体重比值与阴性对照组比较，无显著性差异（P>0.05）。
3.2.3对小鼠细胞免疫的影响 连续灌胃30天后，中，高剂量组小鼠的耳壳增重显著高于对照组（表3，P<0.05，P<0.01）;三个剂量组小鼠的淋巴细胞增殖能力与对照组相比，无显著性差异（表3，P>0.05）。
3.2.3对小鼠体液免疫功能： 与阴性对照组比较，各剂量组小鼠溶血空斑数，无明显变化，差异无统计学意义（表4，P>0.05）;中、高剂量组小鼠的血清溶血素值显著高于与对照组;差异有统计学意义（表4，P<0.05）。
3.2.4.小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能：三个剂量组小鼠的单核-巨噬细胞碳廓清吞噬指数与阴性对照组相比，无显著性差异（表5，P>0.05）;中、高剂量组小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞指数较阴性对照组明显升高，差异有统计学意义表5，P<0.05）。
3.2.5.小鼠NK细胞活性的影响：三个剂量组小鼠的NK细胞活性与对阴性照组相比，无显著性差异（表6，P>0.05）。
讨论
以上实验显示，罗布麻叶对高血压大鼠具有降压作用，对正常大鼠血压、心率均无影响;罗布麻叶还可以增强小鼠迟发型变态反应、增加小鼠血清溶血数值、可提高巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬能力。对实验数据进一步分析发现，降血压实验：第二周开始罗布麻叶对高血压大鼠逐渐有影响，慢慢的下降，第四周时中剂量组、高剂量组大鼠的血压较高血压空白组明显低，具有显著性差异，且具有一定的剂量量效关系。说明罗布麻叶达到50mg/ml（折合药材0.5g/kg）可以降低高血压大鼠的血压。增强免疫力实验：低剂量组所有指标均体现与阴性对照无显著性差异，中剂量、高剂量显示在迟发型变态反应（耳壳增重）、血清溶血数值、巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬指数较阴性对照组，具有显著增加。说明罗布麻叶达到17mg/ml（折合药材0.33g/kg）可以增强小鼠免疫力。罗布麻叶具有增强动物免疫力、降低高血压动物血压的作用，降低血压剂量要求较高。
引用文献
1.赵晓娟，胡律江，郭慧玲，等.罗布麻药理作用研究进展.江西中医药.2014年 10月，第10期总45卷第382期：76-78
2.李庆华，魏春雁，李建东，等.罗布麻叶药理作用及临床应用研究进展.中药材.第 2008年5月，31卷第5期 ：784-787
3.周本宏，刘刚，胡先明，等.罗布麻对红细胞膜脂质过氧化损伤的保护作用.广东药学院学报， 2004， 20（5）： 506-508
4.苏冬梅，岳常青， 吕锐，等.罗布麻对耐药性菌株R质粒的作用.青岛大学医学院学报，2005，41（4）：352