下调人脐带间充质干细胞Mbd3基因shRNA慢病毒的构建及鉴定

来源 :生物学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户：hello199228

【摘要】

：

研究构建靶向抑制人Mbd3表达的shRNA慢病毒颗粒，感染人脐带间充质干细胞并用嘌呤霉素筛选获得Mbd3稳定下调的细胞系，为进一步探讨Mbd3在诱导型多潜能干细胞形成中的作用提供实

【作者】

：

闫姗姗周艳李溪张磊孙茂盛解裕萍李鸿钧

【机构】

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中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室,昆明医科大学附属第一医院骨科

【出处】

：

生物学杂志

【发表日期】

：

2015年3期

【关键词】

：

Mbd3基因基因沉默慢病毒载体 RNA干扰 Mbd3 gene gene silencing lentiviral vector RNA interf

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研究构建靶向抑制人Mbd3表达的shRNA慢病毒颗粒，感染人脐带间充质干细胞并用嘌呤霉素筛选获得Mbd3稳定下调的细胞系，为进一步探讨Mbd3在诱导型多潜能干细胞形成中的作用提供实验基础。研究根据Gene Bank中公布的Mbd3基因序列设计特异性siRNA干扰序列并合成可产生shRNA的双链DNA，经双酶切后克隆至pLVshRNA-EGFP（2A）Puro载体上构建慢病毒重组质粒，转化DH5α大肠杆菌PCR检测筛选阳性质粒，利用HEK293Ta包装产生含有Mbd3shRNA的慢病毒颗粒。通过RT-PCR

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