目的探讨小鼠海马神经干细胞(NSCs)的体外培养及Wnt/β-catenin信号通路激活剂Wnt3a对体外培养NSCs增殖和分化的影响,以期为脑血管与神经系统疾病的预防与治疗提供新的思路。方法通过无血清悬浮培养法获得新生24 h小鼠海马NSCs,光镜观察NSCs的形态变化,免疫化学染色法鉴定。将NSCs分为正常对照组(sham组),Wnt3a低剂量组(10μg/ml)、Wnt3a中剂量组(25μg/ml)和Wnt3a高剂量组(50μg/ml)。CCK-8法检测各组NSCs增殖活力;流式细胞仪检测各组NSCs的细胞周期; Western blot法检测各组中神经元特异烯醇化酶(NSE)与胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达变化。结果成功分离、培养小鼠海马NSCs,光镜下呈典型细胞球,巢蛋白(Nestin)阳性。免疫荧光检测显示,NSCs经诱导分化为NSE和GFAP阳性细胞。CCK-8法检测表明,与sham组比较,随着Wnt3a浓度的增加,相应的培养组细胞在450 nm处吸光度值增加,NSCs的增殖活力增加,其促进作用呈剂量依赖性(P <0. 05)。流式细胞仪检测显示,与sham组比较,随着Wnt3a浓度的增加,相应的培养组细胞所处G1期比例降低,(S+G2)期比例升高,NSCs的增殖速率提高(P <0. 05)。Western blot显示,与sham组比较,Wnt3a低、中和高剂量组的NSE蛋白相对表达量提高(P <0. 05),而GFAP蛋白相对表达量降低(P <0. 05)。结论体外成功培养NSCs; Wnt3a激活Wnt/β-catenin信号通路可调控NSCs的增殖,促进其向神经元方向分化,抑制其向星形胶质细胞方向分化。