【摘 要】
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目的:观察靶向shRNA质粒表达载体(PGPU6/GFP/Neo-GRP78)对大肠癌PKO细胞系GRP78mRNA汲蛋白的作用.方法:采用免疫组织化学及半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测结直肠
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目的:观察靶向shRNA质粒表达载体(PGPU6/GFP/Neo-GRP78)对大肠癌PKO细胞系GRP78mRNA汲蛋白的作用.方法:采用免疫组织化学及半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测结直肠腺癌、腺瘤及正常黏膜组织,PGRP7865表达:使用脂质体2000将GRP78靶向shRNA质粒表达载体(PGPU6/GFP/Neo-GRP78)转染至RKO细胞内,应用RT-PCR与Western blot法检测GRP78基因及蛋白的表达.结果:GRP78在结直肠癌组织中的表达水平显著高于正常黏膜组织(9.470±0.754 vs 0.780±2.468,Z=-8.140,P<0.05),腺瘤组织中其表达水平高于正常黏膜组织而低于癌组织,差别有统计学意义(5.330±2.744 vs 1.000±0.840,9.560±2.093,均P<0.05).然而在mRAN水平上,GRP78在3种组织中的表达无统计学意义:靶向shRNA质粒表达载体PGPU6/GFP/NeoGRP78能明显抑制RKO细胞中GRP78蛋白及mRNA的表达(F=11.670,27 1.860,均P<0.05).结论:靶向shRNA质粒表达栽体(PGPU6/GFP/Neo-GRP78)能明显抑制RKO细胞GRP78mRNA及蛋白的表达,为进一步明确GRP78在结直肠腺癌细胞增殖动力学中的作用奠定了实验基础.
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