【摘 要】
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目的鉴定NF-κB/p65-shRNA质粒并转染入骨髓间充质干细胞,检测靶细胞在NF-κB通路激活时磷酸化NF-κB/p65的表达。方法用双酶电泳鉴定所得质粒。使用HP试剂将NF-κB/p65-shRN
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(31070831)
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目的鉴定NF-κB/p65-shRNA质粒并转染入骨髓间充质干细胞,检测靶细胞在NF-κB通路激活时磷酸化NF-κB/p65的表达。方法用双酶电泳鉴定所得质粒。使用HP试剂将NF-κB/p65-shRNA质粒转染至小鼠BMSCs,在荧光显微镜下观察绿色荧光,并且以流式细胞术检测转染效率,最后以Western Blot检测转染后靶细胞在炎症环境下对磷酸化NF-κB/p65表达的抑制情况。结果 NF-κB/p65-shRNA质粒酶切鉴定结果与预期一致;流式细胞术检测转染效率达到52.76%;Western Blot检测在炎症环境刺激下,转染后靶细胞磷酸化NF-κB/p65表达明显降低。结论成功将NF-κB/p65-shRNA质粒转染至BMSCs中并有效表达,为进一步实验通过BMSCs修复和重建骨关节炎患者的软骨组织奠定基础。
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