探讨P311和TGF－β1在小鼠皮肤Fb中的相互作用及其对Fb功能的影响。
方法取P311野生型和P311基因敲除型C57BL/6新生小鼠各5只，分离培养2种小鼠皮肤Fb。采用第2代Fb完成以下实验，每个实验重复3次。(1)取P311野生型小鼠Fb，按随机数字表法(分组方法下同)分为空白对照组和P311过表达组，每组36孔。空白对照组每孔加入10 μL空载体腺病毒，P311过表达组每孔加入等效价P311腺病毒表达载体。培养48 h后，采用实时荧光定量RT－PCR法和蛋白质印迹法分别检测2组Fb的P311 mRNA及TGF－β1、α平滑肌肌动蛋白(α－SMA)、Ⅰ型胶原的mRNA和蛋白表达量(检测方法下同)。(2)取P311野生型和P311基因敲除型小鼠Fb各4瓶，待细胞生长至80%～90%融合时，检测2种Fb的TGF－β1、α－SMA、Ⅰ型胶原的mRNA和蛋白表达量。(3)取P311野生型小鼠Fb用体积分数为1%FBS的DMEM培养液饥饿处理3 h后，分为空白对照组及5、10、15、20、25 ng/mL TGF－β1组，每组2瓶。空白对照组常规培养，后5组Fb分别加入5、10、15、20、25 ng/mL TGF－β1溶液，培养48 h后检测6组Fb的P311 mRNA表达量。另取P311野生型小鼠Fb，分为空白对照组和10 ng/mL TGF－β1组，每组6孔，免疫荧光法检测2组Fb的P311蛋白表达情况。(4)将P311野生型小鼠Fb同前饥饿处理后，分为空白对照组和10 ng/mL TGF－β1组，每组2瓶，空白对照组常规培养，后组加入10 ng/mL的TGF－β1溶液，培养48 h后，检测2组Fb的α－SMA、Ⅰ型胶原的mRNA和蛋白表达量。取P311基因敲除型小鼠Fb，同前分组及处理后，检测2组Fb的α－SMA、Ⅰ型胶原的mRNA和蛋白表达量。对数据行单因素方差分析、t检验。
结果(1)P311过表达组Fb的P311 mRNA表达水平较空白对照组增高近30万倍(t＝9.942，P<0.001)。P311过表达组Fb的TGF－β1、α－SMA、Ⅰ型胶原的mRNA，以及TGF－β1前体、TGF－β1活化态、α－SMA、Ⅰ型胶原的蛋白表达量均较空白对照组明显升高(t值为8.192～49.090，P值均小于0.01)。(2)P311基因敲除型小鼠Fb的TGF－β1、α－SMA、Ⅰ型胶原的mRNA表达量较P311野生型小鼠Fb明显降低(t值为8.157～22.270，P值均小于0.01)。P311基因敲除型小鼠Fb的TGF－β1前体、α－SMA、Ⅰ型胶原的蛋白表达量较P311野生型小鼠Fb明显降低(t值为2.995～12.600，P<0.05或P<0.01)，2种Fb的TGF－β1活化态蛋白表达量相近(t＝1.070，P>0.05)。(3)空白对照组及5、10、15、20、25 ng/mL TGF－β1组Fb的P311 mRNA表达量分别为1.28±0.44、3.61±0.91、6.64±0.92、6.58±1.04、1.79±0.31、0.16±0.06。与空白对照组Fb的P311 mRNA表达量比较，5、20 ng/mL TGF－β1组无明显变化(t值分别为2.302、0.955，P值均大于0.05)，10、15 ng/mL TGF－β1组明显增高(t值分别为5.630、4.710，P值均小于0.001)，25 ng/mL TGF－β1组明显降低(t＝2.509，P<0.01)。10 ng/mL TGF－β1组Fb的P311蛋白表达明显强于空白对照组。(4)P311野生型小鼠10 ng/mL TGF－β1组Fb的α－SMA、Ⅰ型胶原的mRNA和蛋白表达量均较空白对照组有不同程度的升高(t值为3.523～14.290，P<0.05或P<0.01)。P311基因敲除型小鼠10 ng/mL TGF－β1组Fb的α－SMA、Ⅰ型胶原的mRNA和蛋白表达量均较空白对照组有不同程度的升高(t值为4.895～14.870，P<0.05或P<0.01)。
结论P311和TGF－β1在小鼠皮肤Fb中存在相互作用，可共同促进Fb的分化。