论文部分内容阅读
目的
阐明应激状态下肝癌细胞HepG2是否主动分泌Y-盒结合蛋白1（YB-1），并初步探讨胞外YB-1的病理意义与作用机制。
方法浓度梯度的脂多糖（LPS）、阿霉素刺激处理HepG2，离心收集培养上清液，采用已建立的化学发光免疫分析法（CLIA）实时定量检测上清液中YB-1水平；免疫共沉淀技术检测胞外YB-1是否特异结合Notch3受体，Western blot分析Notch-跨腹受体表达；浓度梯度的重组YB-1与HepG2共培养，四甲基偶氮唑盐法与细胞迁移实验检测HepG2细胞的增殖与侵袭转移。多组间数据比较采用单因素方差分析。
结果CLIA检测结果显示培养液上清液中胞外YB-1水平显著高于对照组（F = 10.54，P<0.001），分泌表达量在刺激培养（LPS：8 ng/ml和阿霉素：10 ng/ml）4 h后达高峰；免疫共沉淀与Western blot结果证实胞外YB-1特异结合并上调表达Notch3；四甲基偶氮唑盐法与细胞迁移实验表明胞外YB-1显著促进HepG2细胞的增殖与侵袭转移（F = 9.405，P<0.001）。
结论化疗药物等应激状态下肿瘤细胞HepG2可经非经典途径主动分泌YB-1，胞外YB-1特异结合并上调表达Notch3受体，进而促进HepG2细胞的增殖与侵袭转移。为阐明肝细胞肝癌发病机制及进一步探讨胞外YB-1与恶性肿瘤的生物学关系奠定了基础。