探讨微小RNA-1280(miR-1280)对膀胱癌细胞株BIU-87细胞p21基因表达的激活作用及对膀胱癌细胞周期及增殖的影响。
方法实时定量荧光聚合酶链反应(qRT-PCR)检测膀胱癌细胞株T24、5637、J82、BIU-87和正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1中miR-1280表达水平。选取表达量最低的膀胱癌细胞，分别转染miR-1280模拟物(实验组)和miR-NC(对照组)，qRT-PCR检测两组细胞中miR-1280和p21 mRNA表达水平。染色质免疫共沉淀(ChIP)实验验证miR-1280与p21基因启动子的靶向作用。Western blotting分别检测两组细胞中p21、细胞周期依赖性激酶1(CDK1)、细胞周期蛋白A2(Cyclin A2)mRNA和蛋白的表达。流式细胞术检测细胞周期。四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力。
结果qRT-PCR结果提示，膀胱癌细胞株T24、5637、J82、BIU-87和正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1中miR-1280表达分别为0.503±0.094、0.611±0.054、0.567±0.077、0.257±0.032和1.014±0.090，差异有统计学意义(F＝1.880，P<0.001)。与膀胱癌细胞株T24、5637、J82相比，BIU-87细胞株中的miR-1280表达量最低(P＝0.026，P＝0.003，P＝0.008)。与对照组相比，实验组BIU-87细胞中miR-1280表达显著升高(1 041.000±157.500∶1.023±0.118，t＝6.606，P<0.001)，p21 mRNA表达亦显著升高(5.280±0.660∶1.007±0.070，t＝6.440，P<0.001)。Western blotting结果显示P21蛋白表达上调，CDK1和Cyclin A2蛋白表达下调。ChIP实验结果显示，相比miR-NC转染组，生物素修饰的miR-1280在p21基因启动子区域的富集倍数显著增加(1.246±0.171∶0.519±0.087，t＝3.787，P＝0.009)。实验组BIU-87细胞G0-G1期细胞比例较对照组明显升高(68.360%±3.064%∶46.970%±3.971%，t＝4.263，P＝0.005)。MTT结果显示，与对照组相比，转染miR-1280后的BIU-87细胞从第3天(0.826±0.099∶1.224±0.057，t＝3.505，P＝0.013)开始增殖能力明显降低。
结论miR-1280可通过结合p21基因启动子区域，激活膀胱癌细胞BIU-87中p21基因的表达，从而阻滞细胞周期的进展，抑制细胞的增殖，为膀胱癌的靶向治疗提供了一个新靶点。