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摘要：通过研究MS-222对红鳍东方鲍（Takifugurubripes）幼鱼血液生化指标的影响，以对其使用安全性及麻醉机理的分析提供依据。分别使用20、40、60mg/L等不同浓度的MS-222麻醉紅鳍东方鲍幼鱼，测定麻醉后1/4、4、8、24h和复苏后24h鱼体血糖（GLU），血清中总蛋白（TP）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、总胆红素（T-BIL）、尿素氮（BUN）等血液生化指标和血清溶菌酶（LZM）的活性。结果表明，使用MS-222麻醉对红鳍东方鲍幼鱼的大部分血液生化指标和血清溶菌酶活性均有显著影响，且在高麻醉浓度下，这种影响更加显著。使用MS-222麻醉复苏24h后，红鳍东方鲍幼鱼的大多数血液生化指标和血清溶菌酶活性尚未恢复至麻醉前水平。
关键词：MS-222；红鳍东方鲍（Takifugu rubripes）；血液生化指标
红鳍东方纯（Takifugu rubripes）肉质细嫩、营养丰富，是目前国内养殖较为成功的海水鱼类之一。MS-222全名为间氨基苯甲酸乙酯甲基磺酸盐，作为水生动物麻醉剂具有易处理、效力迅速、安全性高、水溶性好等特点，被美国国家食品及药物管理局（FDA）批准为渔用麻醉剂。在幼鱼和其他方面当中同样得到广泛的应用，尤其在运输当中，有利于对鱼进行相关操作。
血液生化指标可以反应鱼类的生理状况、健康状况和营养水平。为此，通过测量红鳍东方纯幼鱼在麻醉过程中和麻醉复苏后血液生化指标的变化，着重分析麻醉剂对试验鱼应激及对肝肾等器官功能造成的影响，以期为MS一222麻醉红鳍东方纯幼鱼的安全及麻醉机理的分析提供依据。
1材料与方法
1.1试验用鱼
红鳍东方纯幼鱼规格为40～55g，购自大连富谷水产有限公司。鱼体健康、无病。试验前停食24h。
1.2试验用水
试验海水为经过滤后的大连黑石礁海区海水。水温18～20℃，盐度32‰，溶解氧大于7mg/L，总氨氮小于0.05mg/L，亚硝酸盐小于0.01mg/L。
1.3试验器材
溶菌酶（LZM）试剂盒（比浊法）购自南京建成生物科技公司。麻醉试验用200L塑料圆桶、加水用10L塑料桶、电子秤、移液枪（1mL和5mL）、1mL无菌注射器、冰盘、冷冻离心机、水浴锅、1.5mL离心管、-80℃冰箱、计时器、比色皿（0.5cm和1cm）、722分光光度计。
1.4试验方法
1.4.1MS-222溶液的配制 试验前将同浓度的溶液一次性配置，准确称取相应质量的药品，在烧杯中使用玻璃棒搅拌溶解，待全部溶解后加入盛有相应体积水的120L塑料箱，混匀后待用。
1.4.2试验浓度的选定及分组 设定一个对照组不麻醉幼鱼，用K表示。MS-222麻醉试验组用M表示，M后第一个数字表示浓度，1、2、3分别对应20、40、60mg/L。各组分别在麻醉1/4、4、8、24h和复苏后24h时取血清测量其生化指标和血清溶菌酶浓度。每桶麻醉试验鱼30尾，每个时间段随机取鱼5尾，采血待测。
1.4.3采血及测定 取特定麻醉时间段试验鱼，放人铺好纱布的冰盘中，用湿纱布将试验鱼头部蒙住，再用1mL一次性无菌注射器在试验鱼尾部采血，分装入4～5个离心管，在4℃冷冻离心机中12000r/min离心10min后取3份大于300肚L的上清液样品送至大连市体检中心。测量血清生化指标：血糖、总蛋白、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆红素、尿素氮。余下血清待测溶菌酶（LZM），酶的测定使用南京建成有限公司试剂盒，采用比浊法中的自身对照法测定，按照试剂盒说明书进行相关操作，溶菌酶1g=80U。
1.5数据处理
试验结果用SPSS statistics17.0进行处理，在单因素方差分析的基础上采用Duncan多重比较分析数据，试验结果用平均值±标准差的形式表示，P<0.05时差异显著。
2结果与分析
2.1麻醉剂对红鳍东方纯幼鱼血糖（GLU）的影响
由表1所示，部分麻醉组与对照组GLU有显著差异。对照组GLU在24h内较稳定，48h后各组GLU较麻醉1/4h时均降低。麻醉组在麻醉过程中只有M3组一直与对照组差异不显著，其他各组均显示为1/4h时GLU升高。M1组麻醉4、8h时与对照组GLU差异不显著。M2组在麻醉4、8h时GLU均显著高于对照组，M1、M2组在麻醉24h时GLU显著低于对照组，且在复苏后24h时GLU显著高于对照组。
2.2麻醉剂对红鳍东方纯幼鱼血清总蛋白（TP）的影响
由表2所示，麻醉1/4h时各组血清TP与对照组无显著差异。麻醉4、8、24h时M3组血清TP显著低于对照组，M1、M2组麻醉24h时血清TP显著低于对照组，其他各组麻醉时间内血清TP与对照组差异不显著。复苏24h后各组血清TP与对照组差异不显著。
2.3麻醉剂对红鳍东方纯幼鱼血清谷丙转氨酶（ALT）的影响
由表3所示，麻醉组试验鱼在麻醉1/4h时ALT活性与对照组差异不显著。M1、M2组与对照组无显著差异，M3组从麻醉4h开始血清中ALT要显著高于对照组。复苏24h后，M3组血清中ALT浓度仍显著高于对照组。2.4麻醉剂对红鳍东方纯幼鱼血清谷草转氨酶（AST）的影响
由表4所示，麻醉组试验鱼在麻醉1/4h时AST活性与对照组差异不显著，麻醉4h、8h和24h时M3组AST活性显著高于对照组。M2组在麻醉24h时AST活性显著高于对照组。复苏24h后各组AST活性均与对照组无显著差异。
2.5麻醉剂对红鳍东方纯幼鱼血清总胆红素（T-BIk）的影响
由表5所示，麻醉各组麻醉时T-BIL均显著高于对照组。复苏24h后各组与对照组无显著差异。 2.6麻醉剂对红鳍东方纯幼鱼血清尿素氦（BUN）的影响
由表6所示，试验鱼在麻醉4、8h时，M3组血清BUN显著低于对照组，其他组差异不明显。试验鱼在麻醉24h时麻醉各组BUN显著低于对照组；试验鱼在复苏24h后M2、M3组BUN显著低于对照组。
2.7麻醉剂对红鳍东方纯幼鱼血清溶菌酶（LZM）的影响
由表7所示，试验鱼在麻醉期间，M1组血清中LZM活性鱼对照组始终无显著差异，M2、M3组血清中LZM活性显著高于对照组。复苏24h后各组LZM活性均显著高于对照组。
3讨论
3.1麻醉剂对红鳍东方纯幼鱼血液生化指标的影响
血糖是一个应激指标，受摄食状态和环境条件等因素的干扰，试验鱼试验前全部停食24h，使试验鱼达到消化吸收后状态。表1所示对照组试验鱼血糖24h内一直处于较稳定的状态，在复苏后24h有所降低。说明试验鱼在未受到麻醉等外界因素胁迫时血糖24h内处于较稳定的状态，48h时血糖略有降低。而麻醉组除M3组外其他各组在麻醉1/4h时血糖浓度均显著高于对照组。这可能与试验鱼受到外界环境突变产生应激反应有关，一方面试验鱼需要耗能来维持机体稳定，加快了肝糖原和肌糖原的分解，另一方面，试验鱼被麻醉活动耗能并受到抑制。M2组4、8h时要显著高于对照组，导致此结果可能是由应激加快糖原分解的速度与代谢消耗的不平衡导致。M1组由于麻醉剂浓度较低，试验鱼对其慢慢适应，与对照组差异不显著，故此浓度不能长时间内达到麻醉效果。而M3组血糖整体处于下降趋势，與对照组无显著影响，可能由于MS-222浓度过高导致在短时间内使试验鱼达到深度麻醉状态，抑制代谢耗能的同时抑制了神经中枢，从而抑制糖原的分解。且复苏后糖原水平要明显低于对照组水平，说明高浓度的麻醉剂对试验鱼产生了短期内的较严重影响。
肝脏是机体代谢的重要器官，血清蛋白主要在肝脏中合成的，血清总蛋白可以间接反映出肝脏的健康状况。试验结果显示，在4～24h时间段内，血清总蛋白显著低于对照组，说明此浓度下麻醉剂在麻醉1/4h时对试验鱼肝脏的影响小，麻醉4～24h时，麻醉剂对试验鱼肝脏的影响显著。M2组在麻醉1/4～8h时试验鱼血清总蛋白与对照组差异不显著，麻醉24h时试验鱼血清总蛋白显著低于对照组。说明随麻醉时间的延长，试验鱼肝脏受影响程度加深。
MS-222对红鳍东方纯幼鱼血清ALT影响结果表明，在1/4h时麻醉组试验鱼谷丙转氨酶与对照组差异不显著，徐滨对鲟鱼类麻醉3min，10min后取样得出MS-222组ALT与对照组差异不显著，这个结果与本试验相同。本试验M1、M2组与对照组无显著差异，此结果说明MS-222浓度不超过40mg/L则不会造成影响。M3组从4h开始ALT显著高于对照组，结果说明较高浓度的MS-222溶液较长时间麻醉会造成组织细胞的受损。当MS-222浓度为60mg/L时麻醉24h，麻醉过程中试验鱼部分组织细胞受损使血液中ALT浓度增加，复苏24h后可以恢复到正常水平，这与徐启明研究结果相同。MS-222对红鳍东方纯幼鱼血清AST影响结果与ALT结果一致，说明使用较高浓度的MS-222较长时间的麻醉（>4h）会使试验鱼的肝脏、心脏中某些组织受损，这与齐红莉等对美洲鲥的研究结果一致。
3.2麻醉剂对红鳍东方纯幼鱼血清溶菌酶的影响
溶菌酶是一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶，能够水解细菌的细胞壁，使细菌溶解。溶菌酶还可与带浮点的病毒蛋白直接结合，与DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复盐，使病毒失活，担负机体内的防御。试验结果显示，试验鱼在麻醉时间内M1组血清中溶菌酶活性与对照组始终无显著差异，说明较低浓度的麻醉剂对红鳍东方纯幼鱼血清中溶菌酶的活性无影响。M2、M3组血清中溶菌酶活性显著高于对照组，说明MS-222浓度40～60mg/L时，试验鱼产生代偿性应激，进而增强免疫力。
（收稿日期：2017-12-16）
关键词：MS-222；红鳍东方鲍（Takifugu rubripes）；血液生化指标
红鳍东方纯（Takifugu rubripes）肉质细嫩、营养丰富，是目前国内养殖较为成功的海水鱼类之一。MS-222全名为间氨基苯甲酸乙酯甲基磺酸盐，作为水生动物麻醉剂具有易处理、效力迅速、安全性高、水溶性好等特点，被美国国家食品及药物管理局（FDA）批准为渔用麻醉剂。在幼鱼和其他方面当中同样得到广泛的应用，尤其在运输当中，有利于对鱼进行相关操作。
血液生化指标可以反应鱼类的生理状况、健康状况和营养水平。为此，通过测量红鳍东方纯幼鱼在麻醉过程中和麻醉复苏后血液生化指标的变化，着重分析麻醉剂对试验鱼应激及对肝肾等器官功能造成的影响，以期为MS一222麻醉红鳍东方纯幼鱼的安全及麻醉机理的分析提供依据。
1材料与方法
1.1试验用鱼
红鳍东方纯幼鱼规格为40～55g，购自大连富谷水产有限公司。鱼体健康、无病。试验前停食24h。
1.2试验用水
试验海水为经过滤后的大连黑石礁海区海水。水温18～20℃，盐度32‰，溶解氧大于7mg/L，总氨氮小于0.05mg/L，亚硝酸盐小于0.01mg/L。
1.3试验器材
溶菌酶（LZM）试剂盒（比浊法）购自南京建成生物科技公司。麻醉试验用200L塑料圆桶、加水用10L塑料桶、电子秤、移液枪（1mL和5mL）、1mL无菌注射器、冰盘、冷冻离心机、水浴锅、1.5mL离心管、-80℃冰箱、计时器、比色皿（0.5cm和1cm）、722分光光度计。
1.4试验方法
1.4.1MS-222溶液的配制 试验前将同浓度的溶液一次性配置，准确称取相应质量的药品，在烧杯中使用玻璃棒搅拌溶解，待全部溶解后加入盛有相应体积水的120L塑料箱，混匀后待用。
1.4.2试验浓度的选定及分组 设定一个对照组不麻醉幼鱼，用K表示。MS-222麻醉试验组用M表示，M后第一个数字表示浓度，1、2、3分别对应20、40、60mg/L。各组分别在麻醉1/4、4、8、24h和复苏后24h时取血清测量其生化指标和血清溶菌酶浓度。每桶麻醉试验鱼30尾，每个时间段随机取鱼5尾，采血待测。
1.4.3采血及测定 取特定麻醉时间段试验鱼，放人铺好纱布的冰盘中，用湿纱布将试验鱼头部蒙住，再用1mL一次性无菌注射器在试验鱼尾部采血，分装入4～5个离心管，在4℃冷冻离心机中12000r/min离心10min后取3份大于300肚L的上清液样品送至大连市体检中心。测量血清生化指标：血糖、总蛋白、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆红素、尿素氮。余下血清待测溶菌酶（LZM），酶的测定使用南京建成有限公司试剂盒，采用比浊法中的自身对照法测定，按照试剂盒说明书进行相关操作，溶菌酶1g=80U。
1.5数据处理
试验结果用SPSS statistics17.0进行处理，在单因素方差分析的基础上采用Duncan多重比较分析数据，试验结果用平均值±标准差的形式表示，P<0.05时差异显著。
2结果与分析
2.1麻醉剂对红鳍东方纯幼鱼血糖（GLU）的影响
由表1所示，部分麻醉组与对照组GLU有显著差异。对照组GLU在24h内较稳定，48h后各组GLU较麻醉1/4h时均降低。麻醉组在麻醉过程中只有M3组一直与对照组差异不显著，其他各组均显示为1/4h时GLU升高。M1组麻醉4、8h时与对照组GLU差异不显著。M2组在麻醉4、8h时GLU均显著高于对照组，M1、M2组在麻醉24h时GLU显著低于对照组，且在复苏后24h时GLU显著高于对照组。
2.2麻醉剂对红鳍东方纯幼鱼血清总蛋白（TP）的影响
由表2所示，麻醉1/4h时各组血清TP与对照组无显著差异。麻醉4、8、24h时M3组血清TP显著低于对照组，M1、M2组麻醉24h时血清TP显著低于对照组，其他各组麻醉时间内血清TP与对照组差异不显著。复苏24h后各组血清TP与对照组差异不显著。
2.3麻醉剂对红鳍东方纯幼鱼血清谷丙转氨酶（ALT）的影响
由表3所示，麻醉组试验鱼在麻醉1/4h时ALT活性与对照组差异不显著。M1、M2组与对照组无显著差异，M3组从麻醉4h开始血清中ALT要显著高于对照组。复苏24h后，M3组血清中ALT浓度仍显著高于对照组。2.4麻醉剂对红鳍东方纯幼鱼血清谷草转氨酶（AST）的影响
由表4所示，麻醉组试验鱼在麻醉1/4h时AST活性与对照组差异不显著，麻醉4h、8h和24h时M3组AST活性显著高于对照组。M2组在麻醉24h时AST活性显著高于对照组。复苏24h后各组AST活性均与对照组无显著差异。
2.5麻醉剂对红鳍东方纯幼鱼血清总胆红素（T-BIk）的影响
由表5所示，麻醉各组麻醉时T-BIL均显著高于对照组。复苏24h后各组与对照组无显著差异。 2.6麻醉剂对红鳍东方纯幼鱼血清尿素氦（BUN）的影响
由表6所示，试验鱼在麻醉4、8h时，M3组血清BUN显著低于对照组，其他组差异不明显。试验鱼在麻醉24h时麻醉各组BUN显著低于对照组；试验鱼在复苏24h后M2、M3组BUN显著低于对照组。
2.7麻醉剂对红鳍东方纯幼鱼血清溶菌酶（LZM）的影响
由表7所示，试验鱼在麻醉期间，M1组血清中LZM活性鱼对照组始终无显著差异，M2、M3组血清中LZM活性显著高于对照组。复苏24h后各组LZM活性均显著高于对照组。
3讨论
3.1麻醉剂对红鳍东方纯幼鱼血液生化指标的影响
血糖是一个应激指标，受摄食状态和环境条件等因素的干扰，试验鱼试验前全部停食24h，使试验鱼达到消化吸收后状态。表1所示对照组试验鱼血糖24h内一直处于较稳定的状态，在复苏后24h有所降低。说明试验鱼在未受到麻醉等外界因素胁迫时血糖24h内处于较稳定的状态，48h时血糖略有降低。而麻醉组除M3组外其他各组在麻醉1/4h时血糖浓度均显著高于对照组。这可能与试验鱼受到外界环境突变产生应激反应有关，一方面试验鱼需要耗能来维持机体稳定，加快了肝糖原和肌糖原的分解，另一方面，试验鱼被麻醉活动耗能并受到抑制。M2组4、8h时要显著高于对照组，导致此结果可能是由应激加快糖原分解的速度与代谢消耗的不平衡导致。M1组由于麻醉剂浓度较低，试验鱼对其慢慢适应，与对照组差异不显著，故此浓度不能长时间内达到麻醉效果。而M3组血糖整体处于下降趋势，與对照组无显著影响，可能由于MS-222浓度过高导致在短时间内使试验鱼达到深度麻醉状态，抑制代谢耗能的同时抑制了神经中枢，从而抑制糖原的分解。且复苏后糖原水平要明显低于对照组水平，说明高浓度的麻醉剂对试验鱼产生了短期内的较严重影响。
肝脏是机体代谢的重要器官，血清蛋白主要在肝脏中合成的，血清总蛋白可以间接反映出肝脏的健康状况。试验结果显示，在4～24h时间段内，血清总蛋白显著低于对照组，说明此浓度下麻醉剂在麻醉1/4h时对试验鱼肝脏的影响小，麻醉4～24h时，麻醉剂对试验鱼肝脏的影响显著。M2组在麻醉1/4～8h时试验鱼血清总蛋白与对照组差异不显著，麻醉24h时试验鱼血清总蛋白显著低于对照组。说明随麻醉时间的延长，试验鱼肝脏受影响程度加深。
MS-222对红鳍东方纯幼鱼血清ALT影响结果表明，在1/4h时麻醉组试验鱼谷丙转氨酶与对照组差异不显著，徐滨对鲟鱼类麻醉3min，10min后取样得出MS-222组ALT与对照组差异不显著，这个结果与本试验相同。本试验M1、M2组与对照组无显著差异，此结果说明MS-222浓度不超过40mg/L则不会造成影响。M3组从4h开始ALT显著高于对照组，结果说明较高浓度的MS-222溶液较长时间麻醉会造成组织细胞的受损。当MS-222浓度为60mg/L时麻醉24h，麻醉过程中试验鱼部分组织细胞受损使血液中ALT浓度增加，复苏24h后可以恢复到正常水平，这与徐启明研究结果相同。MS-222对红鳍东方纯幼鱼血清AST影响结果与ALT结果一致，说明使用较高浓度的MS-222较长时间的麻醉（>4h）会使试验鱼的肝脏、心脏中某些组织受损，这与齐红莉等对美洲鲥的研究结果一致。
3.2麻醉剂对红鳍东方纯幼鱼血清溶菌酶的影响
溶菌酶是一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶，能够水解细菌的细胞壁，使细菌溶解。溶菌酶还可与带浮点的病毒蛋白直接结合，与DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复盐，使病毒失活，担负机体内的防御。试验结果显示，试验鱼在麻醉时间内M1组血清中溶菌酶活性与对照组始终无显著差异，说明较低浓度的麻醉剂对红鳍东方纯幼鱼血清中溶菌酶的活性无影响。M2、M3组血清中溶菌酶活性显著高于对照组，说明MS-222浓度40～60mg/L时，试验鱼产生代偿性应激，进而增强免疫力。
（收稿日期：2017-12-16）