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摘要：目的：探讨当归补血汤配伍剂量变化对血虚小鼠红细胞的作用差异并找出其最佳配比。方法：选用乙酰苯肼（APH）和环磷酰胺（CTX）造小鼠血虚模型，同时灌服不同配伍剂量的当归补血汤，测定小鼠的红细胞相关指标的水平。结果：当归补血汤各剂量组小鼠的红细胞计数（RBC）、血红蛋白（HB）、红细胞压积（HCT）均有不同程度的提高，其中当归补血汤1∶5剂量组效果最佳。结论：当归补血汤中当归与黄芪的比例为1∶5时，对复合化学损伤型血虚小鼠的红细胞相关指标的的治疗效果最好。
关键词：当归补血汤 不同配比 红细胞计数（RBC） 血红蛋白（HB） 红细胞压积（HCT）
Doi：10.3969/j.issn.1671-8801.2013.07.003
【中图分类号】R4 【文献标识码】A 【文章编号】1671-8801（2013）07-0004-01
当归补血汤是一首金元时代源出李东垣《内外伤辨惑论·暑伤胃气论》的补血方剂，具有益气生血功效[1]。本方现代主要用于治疗贫血、白细胞减少症、对抗放化疗副作用等[2]。后人对当归补血汤的配伍比例[3]、药效、主治等有许多争议。本次实验通过对当归补血汤配伍剂量变化对血虚模型小鼠红细胞相关指标影响的研究，探讨其不同配伍剂量对血虚小鼠红细胞的作用差异并找出其最佳配比，为临床治疗化疗型血虚证用药提供实验依据。
1 实验材料
1.1 实验药品。乙酰苯肼（APH），国药北京化学试剂公司产品，CASNO：114-83-0；环磷酰胺（CTX），sigma公司产品，CASNo：6055-19-2；当归、黄芪购于北京同仁堂药店。
1.2 实验动物：小鼠，体重18g～22g，清洁级，雌雄皆用，共85只，由北京中医药大学医学动物实验中心提供。
1.3 实验仪器：全自动血液细胞分析仪，由北京中医药大学医学动物实验中心提供；实验室离心机，由北京中医药大学医学动物实验中心提供；一次性定量取血管。
2 实验方法与步骤
2.1 不同比例当归补血汤的制备：将当归、黄芪粉碎成粗粉，分别按照当归、黄芪1∶1（黄芪7.02g、当归7.02g）、1∶5（黄芪11.7g、当归2.34g）、1∶10（黄芪12.8g、当归1.24g）的比例混合，共3组，分别加水适量加热，沸腾后保持40min，煎煮2次，过滤，滤液离心，合并2次上清液，再将汤剂浓缩至45ml，低温保存待用。
2.2 实验分组、造模与给药。
（1）筛选小鼠并随机分组：筛选饲养3日的体重均匀、体质健康小鼠75只，随机分为5组，每组15只，依次编号1、2、3、4、5。
（2）采用复合化学损伤法制备血虚证模型并给药。将第1组作为空白对照组，分别于第1天、第4天皮下注射生理盐水20mg/kg、40mg/kg体重，从第4天起，每日腹腔注射生理盐水40mg/kg体重，连续给药10天。
第2、3、4、5组分别于第1天、第4天皮下注射APH20mg/kg、40mg/kg体重，从第4天起，每日腹腔注射CTX40mg/kg体重，连续给药4天。
第2组为血虚模型组，同时从第一天起灌服生理盐水0.3ml，连续给药10天
第3组为1∶1实验组，同时从第一天起灌服1∶1当归补血汤煎剂0.3ml，连续给药10天。
第4组为1∶5实验组，同时从第一天起灌服1∶5当归补血汤煎剂0.3mL，连续给药10天。
第5组为1∶10实验组，同时从第一天起灌服1∶10当归补血汤煎剂0.3mL，连续给药10天。
2.3 血样的采集与测定。于末次给药24h后，眶静脉取血加入抗凝管中，采用全自动血液分析仪检测红细胞计数（RBC）、血红蛋白（HB）、红细胞压积（HCT）的数值。
2.4 统计学处理。实验所得数据用均数±标准差（X±S）表示，采用SPSS20.0统计软件进行分析，各组数据方差齐性检验，组间比较进行单因素方差分析用LSD法，P<0.05表示有统计学意义。
3 实验结果
3.1 对贫血小鼠一般状态的影响。在整个实验过程中，空白对照组小鼠精神状态良好，行动敏捷，皮毛光泽，对外周刺激反应灵敏，面、眼、唇、耳、尾部呈粉红色；与空白对照组相比，血虚模型组及各实验组（1∶1实验组、1∶5实验组、1∶10实验组）小鼠在第3次腹腔注射环磷酰胺后不同程度的出现精神萎靡，行动迟缓，对外周刺激反应迟钝、蜷缩、弓背、毛蓬竖、少光泽，面、眼、唇、耳、尾部呈苍白色等现象。给予当归补血汤治疗后，各实验组均能不同程度地改善贫血小鼠的一般状态，其中1∶5实验组改善程度最为明显，但与空白对照组相比，仍存在差别。（注：在实验全过程中，仅血虚模型组中出现1只小鼠死亡的情况，其主要原因考虑与大剂量环磷酰胺的毒副作用有关[4]。）
3.2 当归补血汤对贫血小鼠外周血RBC计数、Hb浓度及Hct的影响。结果见表1，与空白对照组比较，血虚模型组小鼠的RBC计数、Hb浓度及Hct均显著下降（P<0.01）；与血虚模型组比较，1∶1实验组能升高小鼠的RBC计数、Hb浓度及Hct（P<0.05）；1∶5实验组能显著升高小鼠的RBC计数、Hb浓度（P<0.01），能升高小鼠的Hct（P<0.05）；1∶10实验组能升高小鼠的RBC计数、Hb浓度（P<0.05）；实验组间比较，1∶5实验组分别与1∶1实验组、1∶10实验组在对血象RBC计数、Hb浓度的改善方面存在差异（P<0.05）。
表1 当归补血汤对贫血小鼠外周血RBC、Hb及Hct的影响（X±S）
注：与空白组相比，▲▲P<0.01，▲P<0.05；与血虚对照组组相比，★★P<0.01，★P<0.05；各组间比较1）2）3）P<0.05。
4 讨论
本实验采用环磷酰胺与乙酰苯肼联合使用的复合化学损伤型模型[5]。该造模方法能从双重环节上形成动物血虚模型，表现为骨髓超微结构发生变化，造血微环境遭到破坏，骨髓造血重建活性下降，骨髓有核细胞数量及其增殖速度下降，进而导致各类细胞数量的全面下降。采用该方法进行造模，动物存活率较高，血虚状态的持续时间较满意[6]。
本实验研究结果显示，与空白对照组比较，血虚模型组小鼠的RBC计数、Hb浓度及Hct均显著下降，说明血虚模型造模成功。与血虚模型组比，当归补血汤各剂量组小鼠的RBC计数、Hb浓度及Hct均有不同程度的提高，提示当归补血汤水煎液能够减轻环磷酰胺和乙酰苯肼化疗药引起的毒副作用。其中，当归补血汤1∶5剂量组能显著升高化疗贫血模型小鼠的RBC计数、Hb浓度（P<0.01）。
可见当归补血汤中当归与黄芪的比例为1∶5时，对复合化学损伤型血虚小鼠的红细胞相关指标的的治疗效果最好。本实验为当归补血汤治疗化疗型血虚证的探讨提供了一定的实验依据，但为使当归补血汤在今后能更有效、更广泛地应用于临床，还有待进一步的探索研究。
参考文献
[1] 杨丽蓉，杨丽.当归补血汤实验研究综述[J].实用中医药杂志，2005，21（2）：123-124
[2] 宁炼，陈长勋等.当归补血汤促进造血功能的成分及其作用的研究[J].中国中药杂志，2002，27（1）：50-52
[3] 金芳，孙小燕.当归补血汤配伍比例的比较研究[J].中国实验方剂学杂志，1995，1（1）：33-37
[4] 王新禹，梁前进.环磷酰胺的毒副作用机制及应对措施[J].药学进展，2006，30（10）：452-456
[5] 黄丽萍，吴素芬，周俊，等.当归补血汤对三种血虚模型小鼠作用比较[J].中药药理与临床，2011，27（5）：5-8
[6] 金若敏，宁炼，陈长勋，等.血虚模型动物制备及当归补血汤的作用研究[J].中成药，2001，23（4）：268-271
关键词：当归补血汤 不同配比 红细胞计数（RBC） 血红蛋白（HB） 红细胞压积（HCT）
Doi：10.3969/j.issn.1671-8801.2013.07.003
【中图分类号】R4 【文献标识码】A 【文章编号】1671-8801（2013）07-0004-01
当归补血汤是一首金元时代源出李东垣《内外伤辨惑论·暑伤胃气论》的补血方剂，具有益气生血功效[1]。本方现代主要用于治疗贫血、白细胞减少症、对抗放化疗副作用等[2]。后人对当归补血汤的配伍比例[3]、药效、主治等有许多争议。本次实验通过对当归补血汤配伍剂量变化对血虚模型小鼠红细胞相关指标影响的研究，探讨其不同配伍剂量对血虚小鼠红细胞的作用差异并找出其最佳配比，为临床治疗化疗型血虚证用药提供实验依据。
1 实验材料
1.1 实验药品。乙酰苯肼（APH），国药北京化学试剂公司产品，CASNO：114-83-0；环磷酰胺（CTX），sigma公司产品，CASNo：6055-19-2；当归、黄芪购于北京同仁堂药店。
1.2 实验动物：小鼠，体重18g～22g，清洁级，雌雄皆用，共85只，由北京中医药大学医学动物实验中心提供。
1.3 实验仪器：全自动血液细胞分析仪，由北京中医药大学医学动物实验中心提供；实验室离心机，由北京中医药大学医学动物实验中心提供；一次性定量取血管。
2 实验方法与步骤
2.1 不同比例当归补血汤的制备：将当归、黄芪粉碎成粗粉，分别按照当归、黄芪1∶1（黄芪7.02g、当归7.02g）、1∶5（黄芪11.7g、当归2.34g）、1∶10（黄芪12.8g、当归1.24g）的比例混合，共3组，分别加水适量加热，沸腾后保持40min，煎煮2次，过滤，滤液离心，合并2次上清液，再将汤剂浓缩至45ml，低温保存待用。
2.2 实验分组、造模与给药。
（1）筛选小鼠并随机分组：筛选饲养3日的体重均匀、体质健康小鼠75只，随机分为5组，每组15只，依次编号1、2、3、4、5。
（2）采用复合化学损伤法制备血虚证模型并给药。将第1组作为空白对照组，分别于第1天、第4天皮下注射生理盐水20mg/kg、40mg/kg体重，从第4天起，每日腹腔注射生理盐水40mg/kg体重，连续给药10天。
第2、3、4、5组分别于第1天、第4天皮下注射APH20mg/kg、40mg/kg体重，从第4天起，每日腹腔注射CTX40mg/kg体重，连续给药4天。
第2组为血虚模型组，同时从第一天起灌服生理盐水0.3ml，连续给药10天
第3组为1∶1实验组，同时从第一天起灌服1∶1当归补血汤煎剂0.3ml，连续给药10天。
第4组为1∶5实验组，同时从第一天起灌服1∶5当归补血汤煎剂0.3mL，连续给药10天。
第5组为1∶10实验组，同时从第一天起灌服1∶10当归补血汤煎剂0.3mL，连续给药10天。
2.3 血样的采集与测定。于末次给药24h后，眶静脉取血加入抗凝管中，采用全自动血液分析仪检测红细胞计数（RBC）、血红蛋白（HB）、红细胞压积（HCT）的数值。
2.4 统计学处理。实验所得数据用均数±标准差（X±S）表示，采用SPSS20.0统计软件进行分析，各组数据方差齐性检验，组间比较进行单因素方差分析用LSD法，P<0.05表示有统计学意义。
3 实验结果
3.1 对贫血小鼠一般状态的影响。在整个实验过程中，空白对照组小鼠精神状态良好，行动敏捷，皮毛光泽，对外周刺激反应灵敏，面、眼、唇、耳、尾部呈粉红色；与空白对照组相比，血虚模型组及各实验组（1∶1实验组、1∶5实验组、1∶10实验组）小鼠在第3次腹腔注射环磷酰胺后不同程度的出现精神萎靡，行动迟缓，对外周刺激反应迟钝、蜷缩、弓背、毛蓬竖、少光泽，面、眼、唇、耳、尾部呈苍白色等现象。给予当归补血汤治疗后，各实验组均能不同程度地改善贫血小鼠的一般状态，其中1∶5实验组改善程度最为明显，但与空白对照组相比，仍存在差别。（注：在实验全过程中，仅血虚模型组中出现1只小鼠死亡的情况，其主要原因考虑与大剂量环磷酰胺的毒副作用有关[4]。）
3.2 当归补血汤对贫血小鼠外周血RBC计数、Hb浓度及Hct的影响。结果见表1，与空白对照组比较，血虚模型组小鼠的RBC计数、Hb浓度及Hct均显著下降（P<0.01）；与血虚模型组比较，1∶1实验组能升高小鼠的RBC计数、Hb浓度及Hct（P<0.05）；1∶5实验组能显著升高小鼠的RBC计数、Hb浓度（P<0.01），能升高小鼠的Hct（P<0.05）；1∶10实验组能升高小鼠的RBC计数、Hb浓度（P<0.05）；实验组间比较，1∶5实验组分别与1∶1实验组、1∶10实验组在对血象RBC计数、Hb浓度的改善方面存在差异（P<0.05）。
表1 当归补血汤对贫血小鼠外周血RBC、Hb及Hct的影响（X±S）
注：与空白组相比，▲▲P<0.01，▲P<0.05；与血虚对照组组相比，★★P<0.01，★P<0.05；各组间比较1）2）3）P<0.05。
4 讨论
本实验采用环磷酰胺与乙酰苯肼联合使用的复合化学损伤型模型[5]。该造模方法能从双重环节上形成动物血虚模型，表现为骨髓超微结构发生变化，造血微环境遭到破坏，骨髓造血重建活性下降，骨髓有核细胞数量及其增殖速度下降，进而导致各类细胞数量的全面下降。采用该方法进行造模，动物存活率较高，血虚状态的持续时间较满意[6]。
本实验研究结果显示，与空白对照组比较，血虚模型组小鼠的RBC计数、Hb浓度及Hct均显著下降，说明血虚模型造模成功。与血虚模型组比，当归补血汤各剂量组小鼠的RBC计数、Hb浓度及Hct均有不同程度的提高，提示当归补血汤水煎液能够减轻环磷酰胺和乙酰苯肼化疗药引起的毒副作用。其中，当归补血汤1∶5剂量组能显著升高化疗贫血模型小鼠的RBC计数、Hb浓度（P<0.01）。
可见当归补血汤中当归与黄芪的比例为1∶5时，对复合化学损伤型血虚小鼠的红细胞相关指标的的治疗效果最好。本实验为当归补血汤治疗化疗型血虚证的探讨提供了一定的实验依据，但为使当归补血汤在今后能更有效、更广泛地应用于临床，还有待进一步的探索研究。
参考文献
[1] 杨丽蓉，杨丽.当归补血汤实验研究综述[J].实用中医药杂志，2005，21（2）：123-124
[2] 宁炼，陈长勋等.当归补血汤促进造血功能的成分及其作用的研究[J].中国中药杂志，2002，27（1）：50-52
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[5] 黄丽萍，吴素芬，周俊，等.当归补血汤对三种血虚模型小鼠作用比较[J].中药药理与临床，2011，27（5）：5-8
[6] 金若敏，宁炼，陈长勋，等.血虚模型动物制备及当归补血汤的作用研究[J].中成药，2001，23（4）：268-271