【摘 要】
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目的建立一种测定MDCK-Pgp细胞中罗丹明123（R123）浓度的液质联用（LC-MS/MS）法。方法用罗丹明6G（R6G）作为内标,乙腈沉淀法进行蛋白沉淀。色谱柱:Kinetex C18柱（2.1 mm×75 mm,2.6μm）,
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(U1504831);河南省高等学校青年骨干教师计划基金资助项目(2015GGJS-162)
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目的建立一种测定MDCK-Pgp细胞中罗丹明123（R123）浓度的液质联用（LC-MS/MS）法。方法用罗丹明6G（R6G）作为内标,乙腈沉淀法进行蛋白沉淀。色谱柱:Kinetex C18柱（2.1 mm×75 mm,2.6μm）,柱温:40℃,流动相:甲醇-0.1%甲酸水,梯度洗脱,流速:0.30 m L·min-1,进样量:1μL。用电喷雾离子源,正离子检测方式,多反应监测扫描方式进行监测。考察该方法的专属性、标准曲线与定量下限、精密度和回收率、基质效应、稳定性。结果 R123的标准曲线方程为y=2.98×10-3x+2.66（r=0.998 5）,在0.2500.0ng·m L-1内线性关系良好,最低定量限为0.2 ng·m L-1。日内与日间精密度均小于10%,提取回收率为97.60%98.29%,基质效应为98.44%99.40%,长期、短期及反复冻融稳定性良好。5μmol·L-1环孢素给药后30 min和1,2,3 h分别使MDCK-Pgp细胞内R123浓度增加约66%,153%,46%和25%。结论该方法快速、灵敏、准确,适用于测定细胞的R123的浓度,可为细胞中P-gp活性和功能的评价提供便利且快捷的方法。
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