【摘 要】
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目的制备脑炎心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus, EMCV)的3C蛋白酶抗体并检测抗体特异性反应位点。方法构建原核表达载体pQE30-3C，将蛋白进行体外原核表达，免疫纯种BALB/c小鼠，制备单克隆抗体，通过Western blot检测制备的抗体与3C蛋白结合的特异性，通过免疫荧光和Western blot检测抗体与EMCV病毒中表达的3C蛋白酶结合的特异性。原核表
【机 构】
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中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所 传染病预防控制国家重点实验室 传染病诊断与治疗创新协作中心，北京 102206,中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所 传染病预防控制国家重点实验室 传染病诊断与治
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目的制备脑炎心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus, EMCV)的3C蛋白酶抗体并检测抗体特异性反应位点。
方法构建原核表达载体pQE30-3C，将蛋白进行体外原核表达，免疫纯种BALB/c小鼠，制备单克隆抗体，通过Western blot检测制备的抗体与3C蛋白结合的特异性，通过免疫荧光和Western blot检测抗体与EMCV病毒中表达的3C蛋白酶结合的特异性。原核表达具有不同抗原性的EMCV 3C的3个不同片段，并通过Western blot检测单克隆抗体与EMCV 3C蛋白酶不同片段的反应特异性。
结果单克隆抗体与原核表达的3C蛋白酶反应良好，通过Western blot可以检测到病毒中表达的3C蛋白，通过免疫荧光也可以检测到EMCV病毒中的3C蛋白。通过与3C片段的反应发现，单克隆抗体与C端反应，即抗体针对的是C端处的抗原决定簇。
结论成功制备EMCV 3C蛋白酶的抗体，能与原核表达的3C蛋白和病毒3C蛋白反应，且针对的是C端的抗原决定簇。
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