明确以流式细胞术同时检测caspase-1与碘化丙啶或AnnexinⅤ的方法测定小鼠骨髓巨噬细胞炎性死亡的可行性。
方法从野生型(wild type，WT) C57BL/6小鼠和/或C57BL/6背景的caspase-1－/－小鼠分离骨髓细胞，巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stimulating factor，M-CSF)刺激分化7 d成为骨髓巨噬细胞后，分别进行磷酸盐缓冲液(PBS)、脂多糖(LPS)、LPS＋ATP(三磷酸腺苷)处理。蛋白印迹法(Western blot)和酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)检测细胞和上清中的IL-1β和caspase-1的切割成熟及分泌情况；乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH)检测试剂盒检测细胞上清LDH的释放量；以3种流式细胞染色法：TMR red＋caspase-1、PI(propidium iodide)＋caspase-1和AnnexinⅤ＋caspase-1检测小鼠骨髓巨噬细胞的炎性死亡。
结果LPS＋ATP处理后，NLRP3炎症小体被激活(细胞和上清中有IL-1β和caspase-1的切割成熟和分泌)；WT即C57BL/6组细胞上清LDH的释放量多于caspase-1－/－组，表明诱导发生的细胞死亡中存在依赖于caspase-1的炎性死亡方式；流式细胞术同时检测caspase-1与PI或AnnexinⅤ，结果显示LPS＋ATP处理组炎性死亡的百分比显著高于PBS组和LPS组，与已报道的流式检测caspase-1＋TMR red方法的结果类似。
结论流式细胞术同时检测caspase-1与PI或AnnexinⅤ的方法可用于确定小鼠骨髓巨噬细胞的炎性死亡。与已有的流式检测caspase-1＋TMR red方法一样，这两种基于流式细胞术的炎性死亡的检测方法，为小鼠骨髓巨噬细胞的炎性死亡提供了更加直观精准的检测手段。