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目的:从成年雄性豚鼠脂肪中分离培养脂肪干细胞,为脂肪干细胞移植治疗感音神经性耳聋的实验研究创造条件。方法:实验于2005-12/2006-03在河南省高等学校临床医学重点学科开放实验室完成。成年雄性豚鼠,体质量500～750g。分离培养豚鼠脂肪组织,培养三四天后首次换液。倒置显微镜下观察有大量细胞贴壁和漂浮的血细胞,用磷酸缓冲液反复冲洗去除漂浮的细胞,加入DMEM基础培养基+10%胎牛血清培养液。传代前用少量磷酸缓冲液洗涤1次,加入0.25%胰蛋白酶和0.02%乙二胺四乙酸2mL,见大部分细胞胞质回缩、形态变圆,加入2mL含血清的DMEM培养液终止消化,收集细胞悬液、计数,以2×104/cm2细胞密度接种于新的培养皿内。二三天达到融合状态,继续传代培养。四甲基偶氮唑蓝测定第1、3、10代脂肪干细胞生长曲线,流式细胞仪检测脂肪干细胞表面标志。结果:①原代培养显示培养的脂肪间充质干细胞2d左右开始贴壁,7d左右可达90%融合,基本上为梭形成纤维样细胞形态。②生长曲线显示,豚鼠脂肪干细胞在1～3代增值能力较强,以第1代细胞最强,10代以后增殖能力减弱,细胞生长进入平台期。经消化传代后的第1、3、10代细胞均经历24～48h的潜伏期,此后为3～5d对数生长期,逐渐进入生长平台期。14代以前具有活跃的增殖能力。③脂肪干细胞标志CD105,CD44呈阳性表达,而造血干细胞标志CD34阴性表达。结论:成功地建立了一种分离培养豚鼠脂肪间充质干细胞的方法,其生长稳定、增殖较快,可作为干细胞移植治疗感音神经性耳聋实验研究的供体细胞。