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建立了一种利用限制性内切酶酶切、pucm-t载体连接和巢式pcr技术,基于部分已知dna序列测定其两侧翼未知dna序列的新方法,命名为t载体介导的pcr技术,并将此技术应用于宇佐美曲霉(aspergillus usamii)e001的β-甘露聚糖酶基因(aus man5a)5'和3 ′端调控序列的克隆.结果表明:该pcr技术具有操作简便、引物特异性强、结果验证简捷、操作限制少等特点；借助于t载体介导的pcr技术、分子克隆和序列测定等手段,成功地测定了aus man5a两侧翼的调控序列.