【摘 要】
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目的构建人脂联素(APMl)基因真核表达载体,并检测其在HEK293细胞中的表达水平。方法用PCR法从测序正确的pGEM-T-APM1质粒上,扩增出两端带有SfiⅠ酶切位点的人脂联素基因,再将
【机 构】
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重庆医科大学附属第一医院; 重庆医科大学附属第一医院;
【基金项目】
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国家自然科学基金(30370670，30070356)
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目的构建人脂联素(APMl)基因真核表达载体,并检测其在HEK293细胞中的表达水平。方法用PCR法从测序正确的pGEM-T-APM1质粒上,扩增出两端带有SfiⅠ酶切位点的人脂联素基因,再将扩增出的片段亚克隆到T载体上,用SfiⅠ酶切T载体和pCDEF空载体,将酶切后的片段进行连接、转化、筛选、鉴定、测序。将成功构建的pCDEF-APM1质粒转染HEK293细胞,ELISA检测培养上清中脂联素的水平。结果构建的pCDEF-APM1质粒能有效转染HEK293细胞,并在培养上清中检测到较高水平的脂联素蛋白。结论成功地构建了人脂联素基因的真核表达载体,并在HEK293细胞中获得高效表达。
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