【摘 要】
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根据已报道的萝卜抗真菌蛋白Rs-AFP2基因序列,结合基因及其表达调控中遗传密码的偏爱性,人工合成引物,利用PCR重叠延伸法,使编码序列区的部分核苷酸突变,采用嵌套PCR,迅速克
【机 构】
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四川大学生命科学学院,中国热带农科院热带作物生物技术国家重点实验室,四川大学生命科学学院,四川大学生命科学学院
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根据已报道的萝卜抗真菌蛋白Rs-AFP2基因序列,结合基因及其表达调控中遗传密码的偏爱性,人工合成引物,利用PCR重叠延伸法,使编码序列区的部分核苷酸突变,采用嵌套PCR,迅速克隆到目的基因片段Rs-AFPm,连接到pGEM-T easy载体上,转化大肠杆菌XL1菌株,筛选到阳性克隆.序列分析结果表明,PCR产物全长240bp,有一个阅读框,编码29个氨基酸的信号肽和51个氨基酸的抗真菌蛋白,与突变前的Rs-AFP2基因相比,在编码区第3号氨基酸Lys相差一个碱基(TTG→TTA),第5号氨基酸Gln相差
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