【摘 要】
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推测人骨形成蛋白3羧基端的127氨基酸的肽段为其成熟肽(hBMP3m)。将编码此成熟肽的cDNA插入含PL启动子的表达质粒pDH中,构建表达质粒pDHB3m,转化大肠杆菌DH5α。42℃热诱导6h后表达量达到最高水平,约占菌体总
【机 构】
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第四军医大学生物化学与分子生物学教研室;
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推测人骨形成蛋白3羧基端的127氨基酸的肽段为其成熟肽(hBMP3m)。将编码此成熟肽的cDNA插入含PL启动子的表达质粒pDH中,构建表达质粒pDHB3m,转化大肠杆菌DH5α。42℃热诱导6h后表达量达到最高水平,约占菌体总蛋白28%;表达产物以包涵体形式存在。包涵体经分离和洗涤后,溶解于尿素,在变性溶解状态下经阳离子交换层析,目的蛋白纯度至少在95%以上。再经稀释复性。然后将纯化、复性的重组人骨形成蛋白3成熟肽(rhBMP3m)植入小鼠肌肉间隙,于不同时间取材观察,在局部可见典型的软骨形成、软骨内成骨以及骨组织形成的过程,证实所制备的rhBMP3m具有明显的异位诱骨活性。
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