【摘 要】
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目的 观察饥饿诱导对椎间盘纤维环细胞自噬因子LC3和Beclin-1表达的影响.方法 用EBSS(Earle's balanced salt)液饥饿诱导处于对数生长期的纤维环细胞,0、1、2、3 h后用单丹磺
【机 构】
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中山大学孙逸仙纪念医院脊柱外科,中山大学孙逸仙纪念医院普外科实验室
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目的 观察饥饿诱导对椎间盘纤维环细胞自噬因子LC3和Beclin-1表达的影响.方法 用EBSS(Earle's balanced salt)液饥饿诱导处于对数生长期的纤维环细胞,0、1、2、3 h后用单丹磺酰戊二胺(MDC)荧光染色法检测自噬体形成、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法分别检测纤维环细胞微管相关蛋白1轻链3(MAPLC3)和Beclin-1 mRNA和蛋白的表达.结果 随饥饿时间的延长,MDC阳性细胞数及自噬泡数量增多;1 h后LC3-Ⅱ及Beclin-1 mRNA表达开始增加,且随时间增加有增加趋势(LC3-Ⅱ:0.21±0.02、0.45±0.12、0.60±0.05、0.74±0.03,P<0.05;Beclin-1:0.20±0.06、0.37±0.11、0.52±0.07、0.69±0.07,P<0.05);1 h后蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值增加,Beclin-1蛋白表达亦增加,且随时间增加有增加趋势(LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ:0.12.±0.05、0.32±0.09、0.63±0.07、0.92±0.04,P<0.01;Beclin-1:0.61±0.10、0.83±0.11、1.09±0.05、1.35 ±0.10,P<0.05).结论 饥饿可诱导椎间盘纤维环细胞自噬的发生,这可能与椎间盘退变的发生、发展有关.
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