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摘 要：目的：希望能够找到控制硝苯地平智能水凝胶质量的方法。方法：流动相最终决定选择使用1%冰醋酸与甲醇，其比例为70：30，以高分子材料为制备载体，注意避光。结果：选择使用的高效液相色谱法效果好，不仅方法简单，实验结果也非常准确，完全可以将其用来控制智能水凝胶的质量;结论：本文研究的方法简单适用，重现性、回收率都非常高，对评估硝苯地平智能水凝胶的质量有重要意义。
关键词：硝苯地平;智能水凝胶;质量标准;研究
硝苯地平智能胶的主要成分是硝苯地平，载体材料是高分子材料，制备方法为离子胶凝化法，这种一种智能药物，其对PH十分敏感。采用高效液相色谱法对于质量标准进行研究，这种方法可以有效的测定该药物中硝苯地平的含量，但是测定时，需要考虑高分子材料的干扰因素，尽量避免干扰，同时还需要注意避光，否则硝苯地平会逐渐的分解，难以实现质量控制效果[1]。
1 仪器与试药
1.1 仪器
Agilent 1200型高效液相色谱仪，由美国安捷伦公司生产;ODS-90TS（4.8mm×140mm，5m）色谱柱，G1315B二泵，G2170B色谱工作站和7730进样阀。HPD-44真空泵，天津市恒奥科技发展有限公司;F7超声波清洗仪（上海超声波仪器厂）。吉尼斯系列电子分析天平（德国塞多利斯仪器系统有限公司），78-5磁力加热搅拌器 （江苏省金坛市正基仪器有限公司）。
1.2 试药
苯地平智能水凝胶（哈尔滨医科大学，批号：20150118，20150119，2015
0120），硝苯地平精致品（自制，纯度99.7%），N-琥珀酰壳聚糖（中国研究院化学物理研究所，相对分子质量300000，脱乙酰度65%），海藻酸钠（浙江化学试剂站分装厂，批号041207），氯化钙（天津科密欧化学试剂有限公司，批号20140224）。
2 方法与结果
2.1 硝苯地平智能水凝胶的制备
精密称取N-琥珀酰壳聚糖和海藻酸钠适量，加入蒸馏水中，加热搅拌至完全溶解，得浓度为2%的水溶液。精密称取硝苯地平适量（药载比为1：4），加入上述水溶液中，搅拌至硝苯地平完全分散均匀，然后将上述混悬液通过5ml注射器针头（针头内径4.5mm）以1.2ml/min的速度滴加到轻度搅拌的CaCl2～2H2O溶液中交联30min，滴距5cm，反应完毕后过滤小球，水洗，室温放置自然干燥，得载药的N-琥珀酰壳聚糖一海藻酸钙凝胶小球[4]。
2.2 质量控制
2.2.1 紫外吸收。取含量测定项下的溶液，加等量的无水乙醇稀释后。照紫外一可见分光光度法测定，在237nm波长处有最大吸收，在320-355nm的波长处有较大的宽幅吸收。
图1 紫外光谱图
2.2.2 含量测定
（1）色谱条件：色谱柱：ODS-90TS（4.8mm×140mm，5m）;流动相：l%冰醋酸（三乙胺调pH至3-31）-甲醇（30：70，V/V）;流速：0.8ml/min;检测波长：237nm;进样量：20ml;柱温：35℃;保留时间：5min，分离度1.5。（2）对照品溶液的制备：避光，精密称取硝苯地平精制品6.94mg，置50m1棕色量瓶中。加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。（3）供试品溶液的制备：避光，取本品研细的粉末27mg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入pH7.34的枸橼酸盐缓冲液（0.4%吐温-80）50ml，密塞，称定质量，超声处理20min，放冷，再称定质量，加枸橼酸盐缓冲液补足减失的质量，摇匀。转入分液漏斗中，用氯仿萃取3次（20、20、10m1），合并氯仿提取液，转移至50ml棕色量瓶中。加氯仿至刻度，摇匀，精密量取5ml氯仿液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移置25ml棕色量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用0.22m的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得[5]。（4）干扰试验：精密量取对照品溶液、供试品溶液、空白对照溶液各20ml，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。从实验中可见在与对照色谱相应的位置上，空白对照溶液在与硝苯地平色谱峰的位置上无干扰。（5）线性关系考察：精密吸取硝苯地平对照品贮备液0.2、1、2、3、5、6、8ml置10ml棕色量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，配制成系列浓度溶液，在上述色谱条件下进样测定。以峰面积（A）为纵坐标y，浓度（c）为横坐标进行线性回归，得回归方程为Y=69.5742505X-12.949778。r=0.9999。结果表明，硝苯地平在2.776-111.04μg/ml浓度范围内峰面积与浓度均呈良好线性关系。（6）精密度试验：取同一浓度硝苯地平对照品溶液，分别与1d内和4d内按供试品测定项下操作。测得硝苯地平日内RSD为0.73%（n=6），日间RSD为2.10%（n=6），表明仪器精密度良好。（7）加样回收率试验：取已知含量的供试品6份，每份约25mg，精密称定，按高、中、低剂量分别精密加入硝苯地平精制品，混匀，按供试品测定项下方法操作，测定其峰面积，按外标法计算。结果如表1。
表1 加样回收率试验结果
3 讨论
主要选择使用了三种流动相：（1）甲醇与水，比例为60：40;（2）甲醇与1%的冰醋酸，分别为60：40，70：30;3、1%冰醋酸与甲醇，比例为60：40;65：35;70：30，在使用前两种流动相时，发现其形成的品峰形效果不佳，存在着比较拖尾的现象，最终选择使用第三种流动相，其比例为70：30，这一比例不仅能够使阳平形成效果比较好的峰形，而且干扰条件比较少，能够达到徹底的分离。智能水凝胶的制备载体主要是高分子材料，在对此进行制备时，需要对样品进行前期处理，而且处理时还需要考虑高分子材料自身对样品含量会产生相应的影响。另外，高分子材料与样品中的药物主要是以氢键的形式而存在，必须破坏这种氢键，否则药物难以以要求的形式存在，而影响研究效果。本研究中所使用的枸橼酸盐缓冲液，以此来实现复合物的分离的目的。硝苯地平对光敏感，需避光。本文方法所得到的结果准确度高，操作简单，此外，重现性好，能够达到预期的回收效果，可以用来控制硝苯地平智能水凝胶的质量。
参考文献
[1]廖列文，龚涛，周静，周新华，崔英德.DMAEMA系列智能水凝胶的研究进展[J].化工进展，2011（2）.
[2]陈旭日，陈学刚.新型P（NIPAAm-co-IA）pH敏感智能水凝胶的合成与性能研究[J].化学推进剂与高分子材料，2011（2）.
[3]侯红瑞，张平泰.智能水凝胶在给药系统中的应用[J].价值工程，2011（15）.
[4]杨银，邵丽，邓阳全，张志斌.智能水凝胶的制备及其在生物医学中的应用[J].化工新型材料，2010（1）.
[5]于文渊，崔磊，赵宇，颜世峰，朱捷.人脂肪干细胞与聚L-谷氨酸/海藻酸钠可注射水凝胶的生物相容性研究[J].安徽医科大学学报，2012（6）.
关键词：硝苯地平;智能水凝胶;质量标准;研究
硝苯地平智能胶的主要成分是硝苯地平，载体材料是高分子材料，制备方法为离子胶凝化法，这种一种智能药物，其对PH十分敏感。采用高效液相色谱法对于质量标准进行研究，这种方法可以有效的测定该药物中硝苯地平的含量，但是测定时，需要考虑高分子材料的干扰因素，尽量避免干扰，同时还需要注意避光，否则硝苯地平会逐渐的分解，难以实现质量控制效果[1]。
1 仪器与试药
1.1 仪器
Agilent 1200型高效液相色谱仪，由美国安捷伦公司生产;ODS-90TS（4.8mm×140mm，5m）色谱柱，G1315B二泵，G2170B色谱工作站和7730进样阀。HPD-44真空泵，天津市恒奥科技发展有限公司;F7超声波清洗仪（上海超声波仪器厂）。吉尼斯系列电子分析天平（德国塞多利斯仪器系统有限公司），78-5磁力加热搅拌器 （江苏省金坛市正基仪器有限公司）。
1.2 试药
苯地平智能水凝胶（哈尔滨医科大学，批号：20150118，20150119，2015
0120），硝苯地平精致品（自制，纯度99.7%），N-琥珀酰壳聚糖（中国研究院化学物理研究所，相对分子质量300000，脱乙酰度65%），海藻酸钠（浙江化学试剂站分装厂，批号041207），氯化钙（天津科密欧化学试剂有限公司，批号20140224）。
2 方法与结果
2.1 硝苯地平智能水凝胶的制备
精密称取N-琥珀酰壳聚糖和海藻酸钠适量，加入蒸馏水中，加热搅拌至完全溶解，得浓度为2%的水溶液。精密称取硝苯地平适量（药载比为1：4），加入上述水溶液中，搅拌至硝苯地平完全分散均匀，然后将上述混悬液通过5ml注射器针头（针头内径4.5mm）以1.2ml/min的速度滴加到轻度搅拌的CaCl2～2H2O溶液中交联30min，滴距5cm，反应完毕后过滤小球，水洗，室温放置自然干燥，得载药的N-琥珀酰壳聚糖一海藻酸钙凝胶小球[4]。
2.2 质量控制
2.2.1 紫外吸收。取含量测定项下的溶液，加等量的无水乙醇稀释后。照紫外一可见分光光度法测定，在237nm波长处有最大吸收，在320-355nm的波长处有较大的宽幅吸收。
图1 紫外光谱图
2.2.2 含量测定
（1）色谱条件：色谱柱：ODS-90TS（4.8mm×140mm，5m）;流动相：l%冰醋酸（三乙胺调pH至3-31）-甲醇（30：70，V/V）;流速：0.8ml/min;检测波长：237nm;进样量：20ml;柱温：35℃;保留时间：5min，分离度1.5。（2）对照品溶液的制备：避光，精密称取硝苯地平精制品6.94mg，置50m1棕色量瓶中。加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。（3）供试品溶液的制备：避光，取本品研细的粉末27mg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入pH7.34的枸橼酸盐缓冲液（0.4%吐温-80）50ml，密塞，称定质量，超声处理20min，放冷，再称定质量，加枸橼酸盐缓冲液补足减失的质量，摇匀。转入分液漏斗中，用氯仿萃取3次（20、20、10m1），合并氯仿提取液，转移至50ml棕色量瓶中。加氯仿至刻度，摇匀，精密量取5ml氯仿液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移置25ml棕色量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用0.22m的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得[5]。（4）干扰试验：精密量取对照品溶液、供试品溶液、空白对照溶液各20ml，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。从实验中可见在与对照色谱相应的位置上，空白对照溶液在与硝苯地平色谱峰的位置上无干扰。（5）线性关系考察：精密吸取硝苯地平对照品贮备液0.2、1、2、3、5、6、8ml置10ml棕色量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，配制成系列浓度溶液，在上述色谱条件下进样测定。以峰面积（A）为纵坐标y，浓度（c）为横坐标进行线性回归，得回归方程为Y=69.5742505X-12.949778。r=0.9999。结果表明，硝苯地平在2.776-111.04μg/ml浓度范围内峰面积与浓度均呈良好线性关系。（6）精密度试验：取同一浓度硝苯地平对照品溶液，分别与1d内和4d内按供试品测定项下操作。测得硝苯地平日内RSD为0.73%（n=6），日间RSD为2.10%（n=6），表明仪器精密度良好。（7）加样回收率试验：取已知含量的供试品6份，每份约25mg，精密称定，按高、中、低剂量分别精密加入硝苯地平精制品，混匀，按供试品测定项下方法操作，测定其峰面积，按外标法计算。结果如表1。
表1 加样回收率试验结果
3 讨论
主要选择使用了三种流动相：（1）甲醇与水，比例为60：40;（2）甲醇与1%的冰醋酸，分别为60：40，70：30;3、1%冰醋酸与甲醇，比例为60：40;65：35;70：30，在使用前两种流动相时，发现其形成的品峰形效果不佳，存在着比较拖尾的现象，最终选择使用第三种流动相，其比例为70：30，这一比例不仅能够使阳平形成效果比较好的峰形，而且干扰条件比较少，能够达到徹底的分离。智能水凝胶的制备载体主要是高分子材料，在对此进行制备时，需要对样品进行前期处理，而且处理时还需要考虑高分子材料自身对样品含量会产生相应的影响。另外，高分子材料与样品中的药物主要是以氢键的形式而存在，必须破坏这种氢键，否则药物难以以要求的形式存在，而影响研究效果。本研究中所使用的枸橼酸盐缓冲液，以此来实现复合物的分离的目的。硝苯地平对光敏感，需避光。本文方法所得到的结果准确度高，操作简单，此外，重现性好，能够达到预期的回收效果，可以用来控制硝苯地平智能水凝胶的质量。
参考文献
[1]廖列文，龚涛，周静，周新华，崔英德.DMAEMA系列智能水凝胶的研究进展[J].化工进展，2011（2）.
[2]陈旭日，陈学刚.新型P（NIPAAm-co-IA）pH敏感智能水凝胶的合成与性能研究[J].化学推进剂与高分子材料，2011（2）.
[3]侯红瑞，张平泰.智能水凝胶在给药系统中的应用[J].价值工程，2011（15）.
[4]杨银，邵丽，邓阳全，张志斌.智能水凝胶的制备及其在生物医学中的应用[J].化工新型材料，2010（1）.
[5]于文渊，崔磊，赵宇，颜世峰，朱捷.人脂肪干细胞与聚L-谷氨酸/海藻酸钠可注射水凝胶的生物相容性研究[J].安徽医科大学学报，2012（6）.