小鼠IL-3 cDNA逆转录病毒载体的构建及在NIH3T3细胞中的表达

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为了探讨放射损伤小鼠IL-3基因治疗可能性,本文作者将小鼠IL-3cDNA亚克隆到逆转录病毒载体pLXSN上。将重组的逆转录病毒载体用电穿孔法和磷酸钙共沉淀法转染双向包装细胞系PA317,经新霉素类抗菌素G418选择,得到了多个产病毒细胞克隆。用含有复制缺陷病毒的产病毒细胞培养上清转化NIH3T3细胞,得到了数个自发分泌IL-3的克隆。在去掉G418,传代15代,约2个月后,这些克隆分泌IL-3的能力没有明显的变化。 In order to investigate the possibility of IL-3 gene therapy in mice with radiation-induced injury, the authors subcloned mouse IL-3 cDNA into the retroviral vector pLXSN. The recombinant retroviral vector was transfected into the bi-directional packaging cell line PA317 by electroporation and calcium phosphate co-precipitation method, and selected by the neomycin antibiotic G418 to obtain a plurality of virus-producing cell clones. NIH3T3 cells were transformed with virus-producing cell culture supernatant containing replication-defective virus to obtain several clones secreting IL-3 spontaneously. There was no significant change in the ability of these clones to secrete IL-3 after removing G418, passage 15 passages, and about 2 months later.
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