目的探讨人结肠癌细胞中高尔基磷蛋白3（GOLPH3）基因高表达与结肠癌细胞对5-氟尿嘧啶（5-FU）的耐药的相关性。方法 HT29细胞分为5组:对照组（HT29）,转染组（siRNA-GOLPH3）,实验组1(30μmol·L^-15-FU),实验组2(siRNA-GOLPH3+30μmol·L^-15-FU),实验组3(30μmol·L^-15-FU+50μmol·L^-1PD98059)。人结肠癌细胞转染siRNA-GOLPH3,以逆转录聚合酶链反应方法检测GOLPH3基因的沉默效果,以噻唑蓝、流式细胞术检测各组细胞增殖和凋亡,以Western blot法检测GOLPH3,P糖蛋白（P-gp）,ERK1/2和p ERK1/2蛋白的表达。结果对照组和转染组的GOLPH3 mRNA的蛋白相对表达量分别为1.00±0.08和0.15±0.02,差异有统计学意义（P<0.05）,表明GOLPH3基因沉默效果好。实验组1、实验组2和对照组的增殖能力分别为0.80±0.10,0.24±0.09和1.05±0.14,凋亡率分别为（12.87±2.20）%,（34.23±4.76）%和（2.50±1.47）%,实验组1、实验组2的上述指标与对照组比较,差异均有统计学意义（均P<0.05）。对照组的GOLPH3、P-gp、p ERK1/2蛋白表达量分别为0.97±0.10,1.00±0.20和1.00±0.33,实验组1分别为3.63±0.57,2.42±0.26和2.66±0.44,实验组2分别为0.52±0.18,0.47±0.16和0.24±0.09,实验组1的上述指标与实验组2比较,差异均有统计学意义（均P<0.05）。实验组3的P-gp蛋白表达量（0.55±0.04）较实验组1及对照组均明显降低（P<0.05）。结论 GOLPH3高表达可能参与HT29结肠癌细胞对5-FU化疗耐药,其机制可能通过激活MAPK/ERK细胞信号通路而促进HT29结肠癌细胞对5-FU耐药。沉默GOLPH3表达可一定程度上逆转其耐药。