【摘 要】
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目的探讨冷冻治疗诱发肿瘤细胞凋亡的原因。方法(1)将GL261胶质瘤细胞(1×107个／10 μL)注入C57小鼠背部皮下，建立荷瘤小鼠模型，肿瘤直径达15~20 mm时将小鼠按随机数字表法分为冷冻治疗组(n=17)和假手术组(n=15)，前者行冷冻手术治疗，后者只插入冷冻刀但不进行冷冻操作。术后2 h提取冷冻肿瘤组织释放物；术后12 h、24 h TUNEL染色检测肿瘤组织凋亡情况；术后24 h
【机 构】
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528403 中山市人民医院脑血管介入科,510282 广州，国家临床重点专科，教育部工程技术研究中心，广东省脑功能修复与再生重点实验室，南方医科大学珠江医院神经外科,510282 广州，国家临床重点
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目的探讨冷冻治疗诱发肿瘤细胞凋亡的原因。
方法(1)将GL261胶质瘤细胞(1×107个／10 μL)注入C57小鼠背部皮下，建立荷瘤小鼠模型，肿瘤直径达15~20 mm时将小鼠按随机数字表法分为冷冻治疗组(n=17)和假手术组(n=15)，前者行冷冻手术治疗，后者只插入冷冻刀但不进行冷冻操作。术后2 h提取冷冻肿瘤组织释放物；术后12 h、24 h TUNEL染色检测肿瘤组织凋亡情况；术后24 h Western blotting实验检测肿瘤组织前体(pro)-Caspase-8、pro-Caspase-8、聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(PARP)的表达。(2)将GL261胶质瘤细胞分为冷冻释放物组、对照组，分别加入1倍浓度的冷冻释放物和等量DMEM，培养12 h后TUNEL染色检测细胞凋亡，Western blotting检测细胞上述凋亡相关蛋白的表达。
结果(1)TUNEL染色显示术后12 h冷冻治疗组小鼠胶质瘤组织切片S1区呈均一性坏死，S2区出现明显凋亡带(早发凋亡)，术后24 h S1区呈均一性坏死，S2区凋亡消退，S3区近靶区侧出现一新发凋亡带(迟发凋亡)。Western blotting检测显示，冷冻治疗组小鼠肿瘤组织S2区pro-Caspase-9和PARP蛋白的表达明显少于S1、S3、S4区，S3区pro-Caspase-8的表达低于S1、S2、S4区，差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)TUNEL染色显示，与对照组比较，冷冻释放物组GL261胶质瘤细胞凋亡率增加，差异有统计学意义(P<0.05)。Western blotting检测显示，与对照组相比，冷冻释放物组细胞pro-Caspase-8、pro-Caspase-9表达下降，差异有统计学意义(P< 0.05)。
结论冷冻治疗后肿瘤组织释放物具有诱发胶质瘤细胞凋亡的作用。
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