【摘 要】
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目的 :筛选及验证miR-148a-3p的靶基因,为深入研究miR-148a的功能建立基础。方法 :我们通过miRanda、Target Scan和PicTar等多种生物信息学方法对mir-148a-3p的靶基因进行了
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(81472860)
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目的 :筛选及验证miR-148a-3p的靶基因,为深入研究miR-148a的功能建立基础。方法 :我们通过miRanda、Target Scan和PicTar等多种生物信息学方法对mir-148a-3p的靶基因进行了预测分析,取共同交集的靶基因;运用生物素标记的RNA进行RNA-RNA pull down来验证优选得到的靶基因;构建过表达miR-148a-3p及干扰miR-148a-3p表达的稳定神经胶质瘤细胞株,用荧光定量PCR实验比较神经胶质瘤与正常胶质细胞中靶基因的表达水平及比较过表达和干扰表达与神经胶质瘤细胞株中靶基因的表达水平。结果 :多种生物信息学网站预测gadd45a为其共同交集的靶基因之一;qRT-PCR结果表明神经胶质瘤中gadd45a的表达较正常胶质细胞低,miR-148a mimics及miR-148a inhibit转染入神经胶质瘤细胞系后,过表达miR-148a的神经胶质瘤细胞中gadd45a较未转染的表达低;RNA pull down结果则表明GADD45a是miR-148a-3p的靶基因。结论 :GADD45A是神经胶质瘤中mir-148a-3p的靶基因之一,mir-148-3p可能通过调控靶基因gadd45a的表达,促进神经胶质瘤细胞的迁移与侵袭。
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