【摘 要】
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目的 构建人Survivin基因的siRNA真核表达载体,探讨其对骨肉瘤细胞MG63凋亡及顺铂化疗的增敏作用.方法 应用pSilencer 3.0-H1 neo,构建Survivin特异性的RNA干涉载体,转染MG63细胞,G418筛选稳定转染的细胞系.半定量PCR和免疫荧光染色分别检测Survivin mRNA与蛋白的水平变化.Annexin V法检测细胞凋亡.MTT法检测顺铂对细胞的杀伤作用.
【机 构】
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710038,西安,第四军医大学唐都医院全军骨科中心,710038,西安,第四军医大学唐都医院全军骨科中心,710038,西安,第四军医大学唐都医院全军骨科中心,710038,西安,第四军医大学唐都医
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目的 构建人Survivin基因的siRNA真核表达载体,探讨其对骨肉瘤细胞MG63凋亡及顺铂化疗的增敏作用.方法 应用pSilencer 3.0-H1 neo,构建Survivin特异性的RNA干涉载体,转染MG63细胞,G418筛选稳定转染的细胞系.半定量PCR和免疫荧光染色分别检测Survivin mRNA与蛋白的水平变化.Annexin V法检测细胞凋亡.MTT法检测顺铂对细胞的杀伤作用.结果 构建Survivin基因siRNA真核表达载体PsiS.获得了稳定转染的细胞系.与MG63、阴性对照细胞比较,MG63/PsiS生长曲线则十分平缓.MG63/PsiS细胞中Survivin的mRNA及蛋白表达明显减少.MG63/PsiS凋亡率增加为17.8%(P＜0.01).1 mg/L顺铂作用下,MG63/PsiS死亡率是其他各组的2.3倍(P＜0.01).结论 特异性siRNA能够明显阻断Survivin基因的表达促进MG63细胞凋亡,提高细胞对顺铂的敏感性。
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