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[摘 要]目的利用雪莲注射液中间體为原料，制备雪莲纳米粒，以提高患者对雪莲用药的顺应性和达到缓释作用。方法以复乳法制备雪莲纳米粒，雪莲原料药溶解于乙二醇中作为内水相，聚乳酸聚乙醇酸共聚物（PLGA）溶解在二氯甲烷-丙酮（2∶1）的混和溶剂中作为油相，加入乳化剂形成W/O型初乳后以蒸馏水作为外水相在乳化剂作用下形成W/O/W型复乳纳米溶液。结果纳米粒的平均粒径在134nm；Zeta电位为-8.06；包封率为42.83%，载药量为2.17%；12h体外释放39.57%。结论复乳法能够得到性质稳定和具有缓释功能的雪莲纳米粒。
[关键词]雪莲 纳米粒 生产工艺
中图分类号：R283 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2014）01-0056-01
雪莲注射液的主要成分包括黄酮、多糖和生物碱类。其中黄酮类成分是雪莲抗炎止痛的主要成分，能够促进肾上腺皮质激素的合成，不但能显著提高小鼠免疫功能，对抗风湿性关节炎[1]，还具有抗癌、解痉、降压和平喘作用。生物碱能够收缩血管，改变血管通透性从而起到强心、抗炎抗风湿和镇痛作用。多糖类成分则具有消除自由基、抗疲劳作用，并且能够兴奋子宫平滑肌，治疗妇女小腹冷痛。纳米中药作为中药现代化的重要手段之一，为药物在机体内的吸收和发挥作用提供了更为广泛的选择，赋予传统中药以新的功能，如缓释、增强靶向性、丰富给药途径、提高生物利用度、降低毒副作用等。本文利用包含雪莲有效成分的雪莲注射液中间体为原料药，将传统的注射液改为复乳型纳米溶液，为制成顺应性更高的剂型提供技术支持。
一、材料与仪器
1、试剂雪莲原料药（雪莲注射液的中间体，新疆民族药中药研究所提供）；聚乳酸聚乙醇酸共聚物（PLGA，50/50，M=15000，山东岱罡生物公司）；芦丁标准品（中国药品生物制品鉴定所）；甲醇（上海凌峰化学试剂有限公司）为色谱纯；氢氧化钠、磷酸二氢钾吐温-80、司班-80（上海医药集团上海化学试剂公司）、二氯甲烷、丙酮、乙二醇、甲醇、乙腈等（国药集团化学试剂有限公司）均为分析纯。
2、 仪器BS124S电子天平：赛多利斯科学仪器（北京）有限公司；SPD-20A岛津高效液相色谱仪：日本岛津公司；布鲁克海文激光粒径仪Zeta PLUS-90：美国布鲁克海文仪器公司；GG-17旋转蒸发仪：上海大研仪器有限公司；TGL-16C高速台式离心机：上海安亭科学仪器厂；电镜：JEM-2010/INCA OXFORD，日本。
二、方法
1、纳米粒的制备称取10mg雪莲注射液中间体超声溶解于1ml乙二醇中，为内水相，称取33.9mgPLGA加入烧杯中，加入2∶1的二氯甲烷-丙酮至重量为2.56g，作为油相，加入司班-800.25g，吐温-800.50g，在油相中加入搅拌子，在磁力搅拌器上高速搅拌使油相和乳化剂混合均匀，然后用注射器抽取0.3ml内水相缓缓滴加到油相中，3000r/min搅拌形成具有蓝色乳光的W/O型初乳。称取吐温-800.65g，加入80ml蒸馏水中作为外水相，在乳化剂作用下将制得的W/O型初乳滴入其中，900r/min搅拌制得W/O/W复乳型纳米溶液。最后将制得的纳米溶液在旋转蒸发仪上旋蒸，去除有机溶剂。
2、粒径测量取适量雪莲纳米粒胶体分散体系加去离子水稀释10倍，用激光散射粒度测定仪测定其粒径平均大小。
3、Zeta电位将稀释10倍的纳米溶液静置1h，用Zeta电位仪测定其电位，平行测定6次。
4、透射电镜实验（TEM）在经透射电镜扫描以前，对纳米溶液应进行处理：配制2%的磷钨酸溶液，将纳米溶液滴加在铜网上后，待表面烘干，滴加1～2滴2%的磷钨酸溶液进行染色，再在灯下将所制样品彻底烘干后进样观察。
5、载药量、包封率的测定采用HPLC法对纳米粒的载药量和包封率进行测定。根据雪莲的有效成分采用芦丁（Rutin）作为标准品，以黄酮类成分的含量反映药物的含量。使用迪马C18反相色谱柱（150mm×4.6mm，5μm）在356nm波长下以甲醇：0.1%磷酸水溶液5∶5为流动相[7]；流速1ml/min。检测得芦丁的保留时间是4.86min。取所制得的纳米溶液1ml，用0.1μm微孔滤膜滤去纳米粒，滤液测定得游离药物的量WF，1ml纳米溶液超声破坏30min，加4倍甲醇沉淀PLGA，10000r/min离心30min，进样测定所得浓度×5为药物总量WT。每毫升纳米溶液冻干后质量为WN，每毫升纳米溶液中药物的投入量为WD。按下式计算包封率、载药量。包封率（%）=（WT-WF）/WT载药量（%）=（WT-WF）/WN
6、体外释放实验[8，9]本实验根据2005版《中国药典》配制磷酸盐缓冲液PBS（pH=7.4）作为释放介质，考察雪莲纳米粒的体外释药曲线。剪取10cm长的透析袋，用沸水煮5～10min，再用蒸馏水冲洗干净。取纳米溶液6ml，加12ml释放介质，转入透析袋中，检查确保不漏液。将透析袋置于盛有70ml释放介质（PBS）烧杯中，加搅拌子37℃恒温50r/min恒速磁力搅拌。在0，2，4，6，8，10，12，24h后从透析袋外取溶液1.5ml，同时补充相同体积的释放介质。将取出的样品进行HPLC检测，计算其中药物含量。配制相同药物浓度的雪莲原料药的PBS溶液，按同样方法测量释放速率。
三、结果
1、纳米粒的制备和形态考察本实验采用复乳法制备雪莲纳米粒，主要以粒径及包封率为表征参数，考察乳化剂和油相的用量对纳米粒形成的影响。
纳米粒的处方优化处方优化以能形成稳定、大小适度的纳米粒和较高的药物包封率为前提，主要从乳化剂的种类和用量、水油相之比等纳米粒形成的关键步骤来筛选优化处方。粒径测定粒径。纳米粒平均粒径为134.6nm。处方优化后制备成纳米粒的粒径分布
Zeta电位用Zeta电位仪测定其电位，测得平均Zeta电位为-8.06。说明纳米溶液较稳定。
透射电镜实验（TEM）用透射电镜观察到纳米粒的形态。由电镜照片看出纳米粒形态为类球形，表面较光滑，大小均匀，纳米粒之间基本无黏连。
2、载药量、包封率和药物利用率包封率（%）=WT-WF/WT=42.83%载药量（%）=（WT-WF）/WN=2.17%
3、体外释放实验原料药和纳米粒的体外释放，雪莲原料药和雪莲纳米粒体外释放曲线由HPLC测定，计算纳米粒溶液和雪莲原料药的体外累积释放率得知，雪莲原料药体外释放在2h达到82.14%，释放速度很快。而在相同条件下，纳米粒溶液在2h时释放为2.08%，12h后达39.57%，释放速度减缓，说明所制得纳米粒能达到较好的缓释效果。
四、讨论
根据PLGA和雪莲原料药的理化特性，选用复乳法制备聚合物纳米粒是行之有效的方法。本实验通过改变油相成分及用量、乳化剂用量从而制备得到理化性质较好的纳米粒溶液。
通过体外实验的考察，雪莲纳米粒与雪莲原料药相比能达到缓释作用，但体内是否能提高生物利用度，还有待于进一步考察。
参考文献
[1] 赵心怡，沈琦，李明丽，贾晓光，波拉提·马卡比力，雪莲纳米粒制备技术，论文网，2011，08.
[关键词]雪莲 纳米粒 生产工艺
中图分类号：R283 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2014）01-0056-01
雪莲注射液的主要成分包括黄酮、多糖和生物碱类。其中黄酮类成分是雪莲抗炎止痛的主要成分，能够促进肾上腺皮质激素的合成，不但能显著提高小鼠免疫功能，对抗风湿性关节炎[1]，还具有抗癌、解痉、降压和平喘作用。生物碱能够收缩血管，改变血管通透性从而起到强心、抗炎抗风湿和镇痛作用。多糖类成分则具有消除自由基、抗疲劳作用，并且能够兴奋子宫平滑肌，治疗妇女小腹冷痛。纳米中药作为中药现代化的重要手段之一，为药物在机体内的吸收和发挥作用提供了更为广泛的选择，赋予传统中药以新的功能，如缓释、增强靶向性、丰富给药途径、提高生物利用度、降低毒副作用等。本文利用包含雪莲有效成分的雪莲注射液中间体为原料药，将传统的注射液改为复乳型纳米溶液，为制成顺应性更高的剂型提供技术支持。
一、材料与仪器
1、试剂雪莲原料药（雪莲注射液的中间体，新疆民族药中药研究所提供）；聚乳酸聚乙醇酸共聚物（PLGA，50/50，M=15000，山东岱罡生物公司）；芦丁标准品（中国药品生物制品鉴定所）；甲醇（上海凌峰化学试剂有限公司）为色谱纯；氢氧化钠、磷酸二氢钾吐温-80、司班-80（上海医药集团上海化学试剂公司）、二氯甲烷、丙酮、乙二醇、甲醇、乙腈等（国药集团化学试剂有限公司）均为分析纯。
2、 仪器BS124S电子天平：赛多利斯科学仪器（北京）有限公司；SPD-20A岛津高效液相色谱仪：日本岛津公司；布鲁克海文激光粒径仪Zeta PLUS-90：美国布鲁克海文仪器公司；GG-17旋转蒸发仪：上海大研仪器有限公司；TGL-16C高速台式离心机：上海安亭科学仪器厂；电镜：JEM-2010/INCA OXFORD，日本。
二、方法
1、纳米粒的制备称取10mg雪莲注射液中间体超声溶解于1ml乙二醇中，为内水相，称取33.9mgPLGA加入烧杯中，加入2∶1的二氯甲烷-丙酮至重量为2.56g，作为油相，加入司班-800.25g，吐温-800.50g，在油相中加入搅拌子，在磁力搅拌器上高速搅拌使油相和乳化剂混合均匀，然后用注射器抽取0.3ml内水相缓缓滴加到油相中，3000r/min搅拌形成具有蓝色乳光的W/O型初乳。称取吐温-800.65g，加入80ml蒸馏水中作为外水相，在乳化剂作用下将制得的W/O型初乳滴入其中，900r/min搅拌制得W/O/W复乳型纳米溶液。最后将制得的纳米溶液在旋转蒸发仪上旋蒸，去除有机溶剂。
2、粒径测量取适量雪莲纳米粒胶体分散体系加去离子水稀释10倍，用激光散射粒度测定仪测定其粒径平均大小。
3、Zeta电位将稀释10倍的纳米溶液静置1h，用Zeta电位仪测定其电位，平行测定6次。
4、透射电镜实验（TEM）在经透射电镜扫描以前，对纳米溶液应进行处理：配制2%的磷钨酸溶液，将纳米溶液滴加在铜网上后，待表面烘干，滴加1～2滴2%的磷钨酸溶液进行染色，再在灯下将所制样品彻底烘干后进样观察。
5、载药量、包封率的测定采用HPLC法对纳米粒的载药量和包封率进行测定。根据雪莲的有效成分采用芦丁（Rutin）作为标准品，以黄酮类成分的含量反映药物的含量。使用迪马C18反相色谱柱（150mm×4.6mm，5μm）在356nm波长下以甲醇：0.1%磷酸水溶液5∶5为流动相[7]；流速1ml/min。检测得芦丁的保留时间是4.86min。取所制得的纳米溶液1ml，用0.1μm微孔滤膜滤去纳米粒，滤液测定得游离药物的量WF，1ml纳米溶液超声破坏30min，加4倍甲醇沉淀PLGA，10000r/min离心30min，进样测定所得浓度×5为药物总量WT。每毫升纳米溶液冻干后质量为WN，每毫升纳米溶液中药物的投入量为WD。按下式计算包封率、载药量。包封率（%）=（WT-WF）/WT载药量（%）=（WT-WF）/WN
6、体外释放实验[8，9]本实验根据2005版《中国药典》配制磷酸盐缓冲液PBS（pH=7.4）作为释放介质，考察雪莲纳米粒的体外释药曲线。剪取10cm长的透析袋，用沸水煮5～10min，再用蒸馏水冲洗干净。取纳米溶液6ml，加12ml释放介质，转入透析袋中，检查确保不漏液。将透析袋置于盛有70ml释放介质（PBS）烧杯中，加搅拌子37℃恒温50r/min恒速磁力搅拌。在0，2，4，6，8，10，12，24h后从透析袋外取溶液1.5ml，同时补充相同体积的释放介质。将取出的样品进行HPLC检测，计算其中药物含量。配制相同药物浓度的雪莲原料药的PBS溶液，按同样方法测量释放速率。
三、结果
1、纳米粒的制备和形态考察本实验采用复乳法制备雪莲纳米粒，主要以粒径及包封率为表征参数，考察乳化剂和油相的用量对纳米粒形成的影响。
纳米粒的处方优化处方优化以能形成稳定、大小适度的纳米粒和较高的药物包封率为前提，主要从乳化剂的种类和用量、水油相之比等纳米粒形成的关键步骤来筛选优化处方。粒径测定粒径。纳米粒平均粒径为134.6nm。处方优化后制备成纳米粒的粒径分布
Zeta电位用Zeta电位仪测定其电位，测得平均Zeta电位为-8.06。说明纳米溶液较稳定。
透射电镜实验（TEM）用透射电镜观察到纳米粒的形态。由电镜照片看出纳米粒形态为类球形，表面较光滑，大小均匀，纳米粒之间基本无黏连。
2、载药量、包封率和药物利用率包封率（%）=WT-WF/WT=42.83%载药量（%）=（WT-WF）/WN=2.17%
3、体外释放实验原料药和纳米粒的体外释放，雪莲原料药和雪莲纳米粒体外释放曲线由HPLC测定，计算纳米粒溶液和雪莲原料药的体外累积释放率得知，雪莲原料药体外释放在2h达到82.14%，释放速度很快。而在相同条件下，纳米粒溶液在2h时释放为2.08%，12h后达39.57%，释放速度减缓，说明所制得纳米粒能达到较好的缓释效果。
四、讨论
根据PLGA和雪莲原料药的理化特性，选用复乳法制备聚合物纳米粒是行之有效的方法。本实验通过改变油相成分及用量、乳化剂用量从而制备得到理化性质较好的纳米粒溶液。
通过体外实验的考察，雪莲纳米粒与雪莲原料药相比能达到缓释作用，但体内是否能提高生物利用度，还有待于进一步考察。
参考文献
[1] 赵心怡，沈琦，李明丽，贾晓光，波拉提·马卡比力，雪莲纳米粒制备技术，论文网，2011，08.