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在我国缺乏用于犬(Canis lupus familiaris)血型鉴定的检测试剂,本研究目的在于制备犬DEA1.1血型鉴定抗体,为宠物犬输血前血型鉴定提供材料。本研究以比格犬为研究对象,以外周血淋巴细胞为抗体基因来源,设计犬抗体可变区基因简并引物,用反转录聚合酶链反应(reverse transcriptionpolymerase chain reaction,RT-PCR)合成cDNA,扩增抗体重链可变区(heavy chain variable region gene,VH)和轻链可变区(light chain variable region gene,VL)基因,用重叠延伸PCR将VH和VL通过Linker连接重组单链抗体(single chain antibody variable fragment,scFv)的基因片段,将scFv基因连接至噬菌体载体pCANTAB 5E,构建犬源单链抗体scFv文库,用斑点酶联免疫吸附测定(dot enzyme-linked immunosorbent assay,Dot-ELISA)方法和犬红细胞抗原1.1(dog erythrocyte antigen 1.1,DEA1.1)血型免疫库为基础,进行3轮筛选。以鉴定阳性的克隆为基础,构建了原核表达重组单链抗体蛋白。结果表明,犬抗体可变区简并引物有效可用,并成功构建犬源单链抗体scFv文库。构建的免疫库实际库容量为7×10~5,具有多样性和足够大的库容量。最终筛选到3株能够与犬DEA1.1血型抗原相结合的单链抗体。检测鉴定原核表达的Clone16蛋白为可溶蛋白。亲和纯化获得Clone16单链抗体进一步用临床样本验证,具有较强结合特性。本研究为制备犬DEA1.1血型鉴定试剂提供了理论依据。