【摘 要】
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目的探讨不同浓度的荧光染料(Hoechst 33342)和抑制剂维拉帕米(verapamil)对流式细胞仪分选侧群(SP)细胞的影响。方法实验分为Hoechst 33342组(Hoechst 33342浓度分别为2.5、
【机 构】
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江苏大学基础医学与医学技术学院,镇江市检验医学重点实验室;
【基金项目】
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国家自然科学基金(91129718,81302119);江苏省自然科学基金(BK2012709,BK20130540);江苏省医学领军人才与创新团队(LJ201117);国家博士点基金项目(20113227110011)
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目的探讨不同浓度的荧光染料(Hoechst 33342)和抑制剂维拉帕米(verapamil)对流式细胞仪分选侧群(SP)细胞的影响。方法实验分为Hoechst 33342组(Hoechst 33342浓度分别为2.5、5.0和7.5μg/mL)和抑制组(Hoechst 33342+verapamil,verapamil浓度分别为50、100和150μmol/L),用流式细胞仪分选人肺腺癌细胞系A549中SP细胞,摸索Hoechst 33342和verapamil的最佳浓度,并用本实验室构建的一株肿瘤细胞系K1进行验证。结果在verapamil和Hoechst 33342浓度分别为150μmol/L和7.5μg/mL时,A549细胞染色充分,SP细胞亚群与非SP(non-SP)细胞亚群分群明显,SP细胞约为2.2%。K1细胞在verapamil为50μmol/L和Hoechst 33342为5μg/mL时,SP细胞亚群与non-SP细胞亚群分群明显,SP细胞亚群可被verapamil抑制,其比例约为1.3%。分选后的SP细胞和non-SP细胞可进一步扩增培养。结论 Hoechst 33342和verapamil可影响肿瘤细胞中SP细胞分选效率。
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