【摘 要】
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目的克隆人硫氧还蛋白-1(human thioredoxin-1,hTrx1)基因,并构建含有该目的基因的重组载体。方法以人胃癌细胞系BCG823、MNK45的总RNA为模板,设计含有酶切位点的特异性引物,
【机 构】
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北京大学第三医院消化科; 北京大学医学部病原生物学系;
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(30770980)
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目的克隆人硫氧还蛋白-1(human thioredoxin-1,hTrx1)基因,并构建含有该目的基因的重组载体。方法以人胃癌细胞系BCG823、MNK45的总RNA为模板,设计含有酶切位点的特异性引物,用逆转录PCR的方法,扩增hTrx1编码蛋白的cDNA片段,连接至EZ-T载体,形成EZ-T-hTrx1。对EZ-T-hTrx1进行双酶切后将目的片段连接至pcDNA3.1myc-His,形成pcDNA3.1myc-His-hTrx1,并进行双酶切、测序鉴定。结果双酶切鉴定显示hTrx1cDNA成功连入pcDNA3.1myc-His质粒;测序结果显示目的片段连入质粒,且与GenBank(NM003329)完全一致。该实验成功构建出含hTrx1的重组载体pcDNA3.1myc-His-hTrx1。结论 hTrx1基因的克隆以及重组载体pcDNA3.1myc-His-hTrx1的成功构建,为进一步探讨hTrx1的生物学活性及其对肿瘤发生的作用机制奠定了基础。
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