目的克隆和表达刚地弓形虫肌动蛋白（TgACT）基因,并分析其免疫反应性。方法提取弓形虫RH株速殖子的总RNA。根据TgACT基因编码序列（登录号为XM₀02369622.1）设计合成引物,进行逆转录PCR（RT-PCR）扩增,扩增产物经双酶切后连接入pET-30a（+）载体。将重组质粒pET30a-TgACT转化至大肠埃希菌（E.coli）DH5α,阳性菌落经PCR和双酶切鉴定,并测序。pET30a-TgACT在E.coli BL21（DE3）中用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达,表达产物经SDS-PAGE鉴定。分别用抗多聚组氨酸标签（Anti-His）抗体和兔抗弓形虫血清为一抗进行蛋白质印迹（Western blotting）分析。结果 RT-PCR扩增产物约为1 100 bp。菌落PCR、双酶切及测序结果显示,重组质粒pET30a-TgACT构建成功。SDS-PAGE结果表明,目的蛋白在E.coli BL21（DE3）中以包涵体形式表达,相对分子质量（M r）约为49 000。通过蛋白的变性和复性处理及纯化,获得可溶性纯化蛋白。Western blotting结果显示,重组TgACT蛋白能被Anti-His抗体和兔抗弓形虫血清识别。结论成功构建重组质粒pET30a-TgACT,获得刚地弓形虫重组肌动蛋白,且具有免疫反应性。