【摘 要】
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用PCR方法从克隆质粒pUC19-RTA中扩增出蓖麻毒素A(RTA)链基因,序列分析正确后,亚克隆到原核表达质粒pET-His中,构建重组表达质粒pET-HisRTA,再转化到E.coli BL21(DE3)plysS中
【机 构】
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中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所,内蒙古大学生物工程中心
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用PCR方法从克隆质粒pUC19-RTA中扩增出蓖麻毒素A(RTA)链基因,序列分析正确后,亚克隆到原核表达质粒pET-His中,构建重组表达质粒pET-HisRTA,再转化到E.coli BL21(DE3)plysS中获得表达工程菌株BL21/pET-HisRTA.该工程菌在30℃经0.4mmol/L IPTG诱导4h后获得可溶性表达的目的蛋白,约占菌体总蛋白的18.45%,SDS-PAGE分析显示表达的蛋白区带与RTA相对分子量相符,约32kDa左右.表达产物经Ni-NTA亲和层析法一步纯化,蛋白纯度
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