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摘要 分析了采用高效液相色谱法测定五氟磺草胺含量时各种不确定度分量的来源并加以评定，以为实验室质量管理和控制提供科学依据。评定程序和方法在类似试验的不确定度评定中有借鉴作用。
关键词 高效液相色谱法；22%五氟磺草胺悬浮剂；有效成分；不确定度
中图分类号 S481. 8 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2017）06-0120-02
Evaluation of Uncertainty on Determination of Effective Component Content in 22% Penoxsulam SC by HPLC
CAO Lei WU Jin-lan BAO Su-ping
（Institute of Product Quality Supervision and Inspection in Jiangsu Province，Nanjing Jiangsu 210007）
Abstract Uncertainty in determination of effective component content in 22% penoxsulam SC by HPLC was evaluated，and its source was analyzed in this paper.The aim of reasonable evaluation of uncertainty of measurement is to provide scientific basis for the laboratory quality management and control.The procedure and method of evaluation are useful for uncertainty evaluation of penoxsulam in the similar experiments.
Key words HPLC；22% penoxsulam SC；effective component；uncertainty
不確定度作为测试和校准方法及方法验证的一个重要技术，要求实验室应建立并实施测定不确定度的评价程序[1-2]。不确定度是表征被测量值的分散性，是一个与测量结果相联系的参数。评定不确定度是分析工作最基本也是最重要的指标，是反映检测全过程的重要标志。若检测结果处于标准限量的临界值时，必须给出不确定度以便对检测结果进行评判，让客户通过测量结果了解测定数据的离散程度。
五氟磺草胺属于三唑并嘧啶磺酰胺除草剂，因具有杀草谱广、低毒高效且持效期长等特点而被广泛应用。本文研究了液相法测定五氟磺草胺含量过程中不确定度的评定与表示方法，具有借鉴及参考意义。
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 仪器及试剂。Agilent 1200高效液相色谱仪，美国安捷伦公司生产；250 mm×4.6 mm（i.d）不锈钢柱，内装Agilent ZORBAX SB-C18，5 μm填充物；电子分析天平（XS105DU型，METTLER TOLEDO）；超声清洗仪（KQ-300E，昆山市超声仪器有限公司）；乙腈（含量99.9%，色谱纯，德国Merck）；磷酸（含量99.5%，分析纯）；新蒸二次蒸馏水（18.2 MΩ·cm，Milli-Q）；五氟磺草胺标样[纯度99.0%，国家农药质检中心（沈阳）提供]；22%五氟磺草胺悬浮剂（企业提供）。
1.1.2 色谱条件。流动相为乙腈 0.1%磷酸水溶液=70 30（v/v）；流速1.0 mL/min；柱温25 ℃；检测波长285 nm；进样体积5 μL。
1.2 试验方法
1.2.1 标准物质溶液的配制。称取0.1 g五氟磺草胺标样（精确至0.000 2 g），置于50 mL容量瓶中，加乙腈后超声使其溶解，冷却至室温后用乙腈稀释至刻度，摇匀。用移液管移取上述溶液5 mL至50 mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度后摇匀过滤即得。
1.2.2 样品溶液的配制。称取含0.1 g五氟磺草胺的试样（精确至0.000 2 g），置于50 mL容量瓶中，加乙腈后超声使溶解，冷却至室温后用乙腈稀释至刻度，摇匀。用移液管移取上述溶液5 mL至50 mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度后摇匀过滤即得。
1.2.3 质量分数测定。在上述操作条件下，待仪器稳定后，连续注入数针标样溶液，直至相邻两针五氟磺草胺峰面积相对变化<1.5%后，按标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。
2 檢测方法不确定度评定
2.1 不确定度的来源
以五氟磺草胺质量分数计算公式为数学模型，可得出不确定度分量来源包括标准物质纯度、标准物质称量、标准物质溶液的配制与稀释、样品称量、样品溶液的配制与稀释、标准物质及样品测量的重复性[2-3]。
2.2 标准物质纯度引入的不确定度
根据标准物质证书中提供的信息，五氟磺草胺纯度为99.0%，不确定度为 0.2%，属于B类评定。按正态分布[1]，取置信水准为95%、K=2，则有：U1=0.2/（2×99.0）=1.00×10-3。
2.3 标准物质称量引入的不确定度
2.4 标准物质溶液配制引入的不确定度
2.5 标准物质溶液稀释引入的不确定度
2.5.2 50 mL容量瓶引入的体积不确定度。同2.4.1，U8=U4=0.028 9 mL。
2.6 样品称量引入的不确定度
2.7 样品溶液配制引入的不确定度 参考2.4所述，样品溶液配制引入的相对不确定度即3.44×10-3。
2.8 样品溶液稀释引入的不确定度
参考2.5所述，样品溶液稀释引入的相对不确定度即0.034 2。
2.9 标准物质及样品测量峰面积的重复性引入的不确定度
标准物质溶液及样品溶液均重复进样5次，峰面积如表1所示。
故本次采用高效液相色谱法测定22%五氟磺草胺悬浮剂中五氟磺草胺含量为22.1%±2.16%。
3 结论
在不确定度的评估过程中，标准物质含量和标样及样品溶液配制、定容操作引入的不确定度占主导地位，即标准物质含量的准确性、玻璃量器的校准以及实验操作人员的规范操作对试验结果具有极其重要的影响[4-6]。本试验最终扩展不确定度的评定结果在符合上述方法和条件的规范化测量情况下可直接引用。
4 参考文献
[1] 规程测量不确定度评定与表示：JJF1059.1-2012[S/OL].（2014-07-07）[2017-01-06].http：//wenku.baidu.com/link？url=iFthNK0PPMAD3w
5yrMik81XaYeQUvSzjSzk6Fn2lXYv8zKrLaTLHv2KT0dj_4IwHGMa6zD-0PzU9K_SQzYnEj_N4lkurpZbDOrSnHgFazDq.
[2] 常用玻璃量器檢定規程：JJG196-2006[S/OL]（2015-07-09）[2017-01-06].http：//www.docin.com/p-337147271.html.
[3] 袁辉，王建玲，远辉.超高效液相色谱发测定葡萄酒中柠檬酸含量的不确定度评定[J].酿酒科技，2008（4）：34-38.
[4] 李卓，舒蕊华，张亚锋，等.高效液相色谱法测定饮料中甜菊糖苷的不确定度评定[J].中国食品添加剂，2017（3）：162-166.
[5] 胡贝贞，蔡海江，宋伟华.茶叶中氟虫腈等8种农药残留的液相色谱-串联质谱法测定及不确定度评定[J].色谱，2012（9）：889-895.
[6] 张雪波.气相色谱法测定茶叶中乐果残留量的不确定度评定[J].福建质量信息，2008（10）：25-27.
关键词 高效液相色谱法；22%五氟磺草胺悬浮剂；有效成分；不确定度
中图分类号 S481. 8 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2017）06-0120-02
Evaluation of Uncertainty on Determination of Effective Component Content in 22% Penoxsulam SC by HPLC
CAO Lei WU Jin-lan BAO Su-ping
（Institute of Product Quality Supervision and Inspection in Jiangsu Province，Nanjing Jiangsu 210007）
Abstract Uncertainty in determination of effective component content in 22% penoxsulam SC by HPLC was evaluated，and its source was analyzed in this paper.The aim of reasonable evaluation of uncertainty of measurement is to provide scientific basis for the laboratory quality management and control.The procedure and method of evaluation are useful for uncertainty evaluation of penoxsulam in the similar experiments.
Key words HPLC；22% penoxsulam SC；effective component；uncertainty
不確定度作为测试和校准方法及方法验证的一个重要技术，要求实验室应建立并实施测定不确定度的评价程序[1-2]。不确定度是表征被测量值的分散性，是一个与测量结果相联系的参数。评定不确定度是分析工作最基本也是最重要的指标，是反映检测全过程的重要标志。若检测结果处于标准限量的临界值时，必须给出不确定度以便对检测结果进行评判，让客户通过测量结果了解测定数据的离散程度。
五氟磺草胺属于三唑并嘧啶磺酰胺除草剂，因具有杀草谱广、低毒高效且持效期长等特点而被广泛应用。本文研究了液相法测定五氟磺草胺含量过程中不确定度的评定与表示方法，具有借鉴及参考意义。
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 仪器及试剂。Agilent 1200高效液相色谱仪，美国安捷伦公司生产；250 mm×4.6 mm（i.d）不锈钢柱，内装Agilent ZORBAX SB-C18，5 μm填充物；电子分析天平（XS105DU型，METTLER TOLEDO）；超声清洗仪（KQ-300E，昆山市超声仪器有限公司）；乙腈（含量99.9%，色谱纯，德国Merck）；磷酸（含量99.5%，分析纯）；新蒸二次蒸馏水（18.2 MΩ·cm，Milli-Q）；五氟磺草胺标样[纯度99.0%，国家农药质检中心（沈阳）提供]；22%五氟磺草胺悬浮剂（企业提供）。
1.1.2 色谱条件。流动相为乙腈 0.1%磷酸水溶液=70 30（v/v）；流速1.0 mL/min；柱温25 ℃；检测波长285 nm；进样体积5 μL。
1.2 试验方法
1.2.1 标准物质溶液的配制。称取0.1 g五氟磺草胺标样（精确至0.000 2 g），置于50 mL容量瓶中，加乙腈后超声使其溶解，冷却至室温后用乙腈稀释至刻度，摇匀。用移液管移取上述溶液5 mL至50 mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度后摇匀过滤即得。
1.2.2 样品溶液的配制。称取含0.1 g五氟磺草胺的试样（精确至0.000 2 g），置于50 mL容量瓶中，加乙腈后超声使溶解，冷却至室温后用乙腈稀释至刻度，摇匀。用移液管移取上述溶液5 mL至50 mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度后摇匀过滤即得。
1.2.3 质量分数测定。在上述操作条件下，待仪器稳定后，连续注入数针标样溶液，直至相邻两针五氟磺草胺峰面积相对变化<1.5%后，按标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。
2 檢测方法不确定度评定
2.1 不确定度的来源
以五氟磺草胺质量分数计算公式为数学模型，可得出不确定度分量来源包括标准物质纯度、标准物质称量、标准物质溶液的配制与稀释、样品称量、样品溶液的配制与稀释、标准物质及样品测量的重复性[2-3]。
2.2 标准物质纯度引入的不确定度
根据标准物质证书中提供的信息，五氟磺草胺纯度为99.0%，不确定度为 0.2%，属于B类评定。按正态分布[1]，取置信水准为95%、K=2，则有：U1=0.2/（2×99.0）=1.00×10-3。
2.3 标准物质称量引入的不确定度
2.4 标准物质溶液配制引入的不确定度
2.5 标准物质溶液稀释引入的不确定度
2.5.2 50 mL容量瓶引入的体积不确定度。同2.4.1，U8=U4=0.028 9 mL。
2.6 样品称量引入的不确定度
2.7 样品溶液配制引入的不确定度 参考2.4所述，样品溶液配制引入的相对不确定度即3.44×10-3。
2.8 样品溶液稀释引入的不确定度
参考2.5所述，样品溶液稀释引入的相对不确定度即0.034 2。
2.9 标准物质及样品测量峰面积的重复性引入的不确定度
标准物质溶液及样品溶液均重复进样5次，峰面积如表1所示。
故本次采用高效液相色谱法测定22%五氟磺草胺悬浮剂中五氟磺草胺含量为22.1%±2.16%。
3 结论
在不确定度的评估过程中，标准物质含量和标样及样品溶液配制、定容操作引入的不确定度占主导地位，即标准物质含量的准确性、玻璃量器的校准以及实验操作人员的规范操作对试验结果具有极其重要的影响[4-6]。本试验最终扩展不确定度的评定结果在符合上述方法和条件的规范化测量情况下可直接引用。
4 参考文献
[1] 规程测量不确定度评定与表示：JJF1059.1-2012[S/OL].（2014-07-07）[2017-01-06].http：//wenku.baidu.com/link？url=iFthNK0PPMAD3w
5yrMik81XaYeQUvSzjSzk6Fn2lXYv8zKrLaTLHv2KT0dj_4IwHGMa6zD-0PzU9K_SQzYnEj_N4lkurpZbDOrSnHgFazDq.
[2] 常用玻璃量器檢定規程：JJG196-2006[S/OL]（2015-07-09）[2017-01-06].http：//www.docin.com/p-337147271.html.
[3] 袁辉，王建玲，远辉.超高效液相色谱发测定葡萄酒中柠檬酸含量的不确定度评定[J].酿酒科技，2008（4）：34-38.
[4] 李卓，舒蕊华，张亚锋，等.高效液相色谱法测定饮料中甜菊糖苷的不确定度评定[J].中国食品添加剂，2017（3）：162-166.
[5] 胡贝贞，蔡海江，宋伟华.茶叶中氟虫腈等8种农药残留的液相色谱-串联质谱法测定及不确定度评定[J].色谱，2012（9）：889-895.
[6] 张雪波.气相色谱法测定茶叶中乐果残留量的不确定度评定[J].福建质量信息，2008（10）：25-27.