【摘 要】
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试验旨在制备A群G11血清型猪轮状病毒(porcine rotavirus,PoRV) VP7蛋白的单克隆抗体,并鉴定其免疫学特性.将A群G11血清型PoRV VP7基因克隆至pGEX-6P-1载体,然后转化大肠杆菌
【机 构】
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东北农业大学生命科学学院,中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
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试验旨在制备A群G11血清型猪轮状病毒(porcine rotavirus,PoRV) VP7蛋白的单克隆抗体,并鉴定其免疫学特性.将A群G11血清型PoRV VP7基因克隆至pGEX-6P-1载体,然后转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,IPTG诱导表达GST-VP7融合蛋白.分离纯化融合蛋白GST-VP7并免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,利用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞并进行有限稀释法克隆化筛选.经3次筛选,最终得到1株能与GST-VP7蛋白反应的特异性、稳定分泌抗体的阳性细胞克隆.Western blotting鉴定结果显示该单克隆抗体具有良好的免疫原性及特异性;MTT法中和试验结果显示其具有中和活性;分泌的单克隆抗体亚型为IgG2b.本试验结果表明A群PoRV VP7蛋白在大肠杆菌中成功表达且制备了单克隆抗体,可用于PoRV VP7蛋白结构和功能的研究,也为猪轮状病毒病的预防、诊断和治疗等研究奠定基础.
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