【摘 要】
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目的通过原核系统表达纯化嵌合肠道病毒71型(EV71)中和表位SP70的病毒样颗粒(VLPs)，作为备选的EV71基因重组亚单位疫苗。方法将SP70插入乙肝病毒核心抗原(HBcAg)截短序列的主要免疫显性区域，合成融合蛋白基因后连接表达质粒转化入大肠埃希菌诱导表达，经DEAE离子交换层析、CsCl垫层离心以及密度梯度离心后得到纯化的重组VLPs，并通过Western Blot和ELISA实验鉴定其
【机 构】
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102206 北京，中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所,102206 北京，中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所,102206 北京，中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所,102206 北京，中国疾
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目的通过原核系统表达纯化嵌合肠道病毒71型(EV71)中和表位SP70的病毒样颗粒(VLPs)，作为备选的EV71基因重组亚单位疫苗。
方法将SP70插入乙肝病毒核心抗原(HBcAg)截短序列的主要免疫显性区域，合成融合蛋白基因后连接表达质粒转化入大肠埃希菌诱导表达，经DEAE离子交换层析、CsCl垫层离心以及密度梯度离心后得到纯化的重组VLPs，并通过Western Blot和ELISA实验鉴定其抗原性。
结果成功构建重组质粒pHBc-SP70，在大肠埃希菌中经IPTG低温诱导后高效表达，可溶性目的蛋白经离子交换层析、CsCl垫层离心和密度梯度离心三步纯化后纯度可达90%以上；纯化的融合蛋白可自发折叠组装为病毒样空心颗粒，与抗SP70单克隆抗体和抗HBc单克隆抗体均可特异性结合。
结论在原核系统中成功高效表达和纯化了表面展示EV71中和表位的嵌合HBc-SP70 VLPs，并证实其具有良好的抗原性，为该EV71基因重组疫苗的免疫效果评价奠定了基础。
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